[發明專利]一種兔皮膚真菌復合PCR檢測方法有效
| 申請號： | 201410204465.9 | 申請日： | 2014-05-15 |
| 公開（公告）號： | CN104004835A | 公開（公告）日： | 2014-08-27 |
| 發明（設計）人： | 劉彥威;劉娜;劉利強;杜鵑;石玉祥;張永英;王慧真 | 申請（專利權）人： | 河北工程大學 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/645 |
| 代理公司： | 石家莊元匯專利代理事務所(特殊普通合伙) 13115 | 代理人： | 劉聞鐸 |
| 地址： | 056038 河*** | 國省代碼： | 河北;13 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 兔皮 真菌 復合 pcr 檢測 方法 | ||
1.一種兔皮膚真菌復合PCR檢測方法，其特征在于,包括以下步驟：
(1)病料DNA提取：疑似感染須癬毛癬菌、犬小孢子菌、絮狀表皮癬菌的病料采用熱裂解的方法提取DNA；
(2)引物的合成：
須癬毛癬菌特異引物：Pa5'GCAAAGAAGCCTGGAAGAAG3'
????????????????????Pb5'GGAGACCATCTGTGAGAGTTG3'
犬小孢子菌特異引物：Pc5'GACCGCCCGTCGCT?ACTAT3'
????????????????????Pd5'TTCGCTGCGTTCTTCATTAG3'
絮狀表皮癬菌特異引物：Pe5'GAAGAAGATTGTCGTTTGCATCGTCTC3'
??????????????????????Pf5'CTCGAGGTCAAAAGCACGCCAGAG3'；
(3)復合PCR：以病料DNA為模板，Pa-Pf3對引物混合為引物進行PCR擴增；
(4)PCR產物檢測：采用瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR產物,凝膠成像分析儀觀察結果。
2.根據權利要求1所述的兔皮膚真菌復合PCR檢測方法，其特征在于，步驟(3)中，PCR的反應體系為：Mixtures10μL，三對引物Pa-Pf最終濃度0.2mM，模板DNA4μL，加ddH2O至總體積20μL。
3.根據權利要求2所述的兔皮膚真菌復合PCR檢測方法，其特征在于，在步驟(3)中，PCR循環參數為：94℃初始變性5min,94℃變性30s，60℃退火30s，72℃延伸30s，35個循環，72℃終延伸10min。
4.根據權利要求1、2或3所述的兔皮膚真菌復合PCR檢測方法，其特征在于，所述須癬毛癬菌特異引物、犬小孢子菌特異引物和絮狀表皮癬菌特異引物的濃度配比為1：1：1。
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