[發明專利]一種篩查子宮內膜癌易感基因的無創檢測試劑盒

無效

• 申請號: 201410203973.5
• 申請日: 2014-05-15
• 公開（公告）號: CN104450876A
• 公開（公告）日: 2015-03-25
• 發明（設計）人: 郭文強;李成;楊華為;李珍;張弓;寧慧青
• 申請（專利權）人: 太原深度解碼基因科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明一種篩查子宮內膜癌易感基因的無創檢測試劑盒，屬于基因檢測試劑盒領域。

背景技術

子宮內膜癌是一種常見的女性生殖道惡性腫瘤，在歐美國家為女性生殖器官三大惡性腫瘤之首，在我國60年代后開始呈現發病率提高及年輕化的趨勢。子宮內膜癌大約占婦女惡性腫瘤的7％左右，每年其新發病例及死亡病例數量分別占婦女惡性腫瘤的3.9％和1.7％。有分子遺傳學研究顯示，子宮內膜癌由于原癌基因激活、抑癌基因失活及DNA錯配修復基因改變等細胞調節路徑逐步改變，從而導致細胞增殖功能失調。

最近的研究表明，子宮內膜癌的發生與CYP1A1、CYP1B1、CYP17、MDM2和NQ01這5個遺傳易感基因密切相關。CYP1A1又稱細胞色素P4501A1，是一種重要的細胞色素P450系氧化代謝酶。該酶廣泛存在于肝外組織中，具有芳烴羥化酶(AHH)活性，參與代謝一些外源性化合物及前致癌物。CYP1B1由于具有激活環境中的前致癌物并催化雌激素轉化為具有基因毒性的兒茶酚雌激素，被認為是多種癌癥的候選致病基因。CYP1B1基因Leu432Val存在多態性，有野生型C/C、雜合型C/G、突變型G/G三種基因型。CYP17是雌激素生物合成限速步驟中編碼關鍵酶的基因，其變異是雌激素生物合成與代謝上調的早期信號，性激素生物合成途徑中酶編碼基因的這種變異具有增加子宮內膜癌危險的可能性。因此，CYP17被認為是子宮內膜癌可疑性的潛在標記物。

MDM2基因的一個常見單核苷酸多態位點309(rs22797444)，在第二個MDM2啟動子加強區域，通過自發性T-G轉換，增加轉錄激活因子Sp1啟動子的親和力，提高MDM2信使RNA以及蛋白表達水平。因此，MDM2癌基因SNPs與子宮內膜癌的發生存在相關性。

NQ01(醌氧化還原酶1)作為一類黃素蛋白酶普遍存在于真核細胞內，具有催化醌雙電子還原反應，對醌及其衍生物有解毒作用，并能解除醌累物質對細胞的毒害，起到保護細胞的作用。有研究表明，NQ01第六外顯子C609T可引起蛋白質編碼氨基酸序列改變，使蛋白質功能改變，影響腫瘤生長。NQ01C609T基因多態性分為純和野生基因型C/C、雜合基因型C/T和純和突變基因型T/T三種。最近研究顯示，純和野生基因型具有完全的NQ01酶活性，雜合基因型酶活性較前者低3倍，純和突變基因型則完全喪失。因此，可以認為NQ01C609T單核苷酸多態性與子宮內膜癌的遺傳易感性有關。

綜上所述，鑒于CYP1A1、CYP1B1、CYP17、MDM2、NQ01基因與子宮內膜癌的發生有著重要的關聯關系，可以做為預測和篩查子宮內膜癌的潛在指征，通過對這些子宮內膜癌易感基因的檢測，能在預測預防和指導治療子宮內膜癌方面起到重要作用，并能大大降低子宮內膜癌在中國人群中的發病概率。因此，有必要對現有技術予以改進。

發明內容

為了克服現有技術的不足，提供一種無痛、無創、清潔、不易引起交叉感染、結果準確可靠的檢測子宮內膜癌發病的致病因素和危險因子的檢測試劑盒。

為了解決上述技術問題，本發明采用的技術方案為：

一種篩查子宮內膜癌易感基因的無創檢測試劑盒，包括：檢測單核苷酸多態性位點基因型的特異性引物與DNA測序引物、PCR反應組件、PCR產物純化組件和DNA測序反應組件，所述PCR反應組件包括Taq酶、dNTP混合液、反應緩沖液、ddH2O，所述PCR產物純化組件包括SAP酶、ExoI酶、ddH2O，所述DNA測序反應組件包括BigDye?mix，EDTA溶液、100％乙醇溶液、70％乙醇溶液、HIDI溶液、ddH2O，所述特異性引物是針對CYP1A1基因上單核苷酸多態性位點Msp?I、CYP1B1基因上單核苷酸多態性位點Leu432Val、CYP17基因上單核苷酸多態性位點MspA1I、MDM2基因上單核苷酸多態性位點309和NQ01基因上單核苷酸多態性位點C609T，能特異性擴增出包含5個SNPs位點的DNA片段的引物對。

所述DNA測序引物是針對CYP1A1基因上單核苷酸多態性位點Msp?I、CYP1B1基因上單核苷酸多態性位點Leu432Val、CYP17基因上單核苷酸多態性位點MspA1I、MDM2基因上單核苷酸多態性位點309和NQ01基因上單核苷酸多態性位點C609T，能通過DNA測序技術特異性檢測出上述5個SNPs位點基因型的DNA測序引物。

所含的五對特異性引物序列如下：

1)CYP1A1Msp?I正向引物：5’GGGAGGAAGAAGAGGAGGTAG3’