[發(fā)明專(zhuān)利]一種產(chǎn)甲烷泡菌的檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410203266.6
• 申請(qǐng)日: 2014-05-14
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103966330A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-08-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 牟伯中;楊世忠;劉金峰;王立影;呂磊
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 華東理工大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/68
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/68;C12Q1/06
• 代理公司: 上海科盛知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31225
• 代理人: 蔣亮珠

1.一種產(chǎn)甲烷泡菌的檢測(cè)方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：

(1).提取待測(cè)樣品中微生物的DNA；

(2).采用特異性引物對(duì)，對(duì)步驟(1)獲得的樣品DNA進(jìn)行熒光定量PCR擴(kuò)增，讀取熒光定量PCR擴(kuò)增反應(yīng)的初始循環(huán)數(shù)；

(3).根據(jù)公式：對(duì)樣品中產(chǎn)甲烷泡菌進(jìn)行定量，其中C_T為初始循環(huán)數(shù)，N為待測(cè)樣品中產(chǎn)甲烷泡菌菌濃。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種產(chǎn)甲烷泡菌的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(2)所述的特異性引物對(duì)序列為：

正向：GTCTCACCAGAACGACTC

反向：TAAGTTTCAGCCTTGCGAC。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種產(chǎn)甲烷泡菌的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(2)所述的熒光定量PCR擴(kuò)增的反應(yīng)體系組成包括：4μL無(wú)菌水，12μL通用SYBR綠色熒光染料混合體系，25μM的正向和反向特異性引物各1μL，2μL標(biāo)準(zhǔn)樣品DNA或待測(cè)樣品DNA。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種產(chǎn)甲烷泡菌的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(2)所述的熒光定量PCR擴(kuò)增的程序?yàn)閷晒舛縋CR擴(kuò)增的反應(yīng)體系按以下程序進(jìn)行反應(yīng)：a)95℃保溫4min；b)94℃保溫45s；c)60℃保溫30s；d)72℃保溫45s；e)重復(fù)執(zhí)行b)～d)65次；f)從65℃開(kāi)始每5s增加0.5℃至達(dá)到95℃為止。