[發(fā)明專利]利用4個(gè)蛋白聯(lián)合預(yù)測食道癌患者預(yù)后的試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410202256.0
• 申請日: 2014-05-09
• 公開（公告）號: CN104034902A
• 公開（公告）日: 2014-09-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張俊毅;白玉勤;瑞云;董彩鳳;許秀娥;吳健誼;許麗艷;李恩民
• 申請（專利權(quán)）人: 赤峰學(xué)院;汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/574
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種預(yù)測食道癌患者預(yù)后的試劑盒，其特征在于試劑盒中包括抗δ-catenin、抗Dynamin-2、抗Erbin和抗LAP-1四種蛋白抗體。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的預(yù)測食道癌患者預(yù)后的試劑盒，其特征在于：試劑盒中還包括山羊血清、0.01M檸檬酸鹽修復(fù)液、3％H₂O₂、Polymer增強(qiáng)劑、Polymer聚合物、DAB顯色試劑、PBS溶液。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的試劑盒在制備聯(lián)合預(yù)測食道癌患者預(yù)后的試劑盒中的應(yīng)用。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于使用試劑盒所檢測的標(biāo)本為中性福爾馬林固定和石蠟包埋的組織蠟塊。

5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的應(yīng)用，其特征在于：所使用的檢測方法為免疫組織化學(xué)超敏型二步法。

6.根據(jù)權(quán)利要求3-5任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于預(yù)測食道癌患者預(yù)后的方法包括如下步驟：標(biāo)本經(jīng)切片、脫蠟、水化后用超敏型二步法檢測目的蛋白的表達(dá)。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于預(yù)測食道癌患者預(yù)后的方法具體如下：切片經(jīng)脫蠟至水、抗原修復(fù)、滅活內(nèi)源性過氧化物酶和山羊血清封閉后，分別與一抗δ-catenin、Dynamin-2、Erbin和LAP-1在保濕盒內(nèi)孵育過夜；隨后分別與Polymer增強(qiáng)劑和Polymer聚合物孵育后經(jīng)DAB顯色和蘇木素復(fù)染細(xì)胞核；最后經(jīng)酒精脫水和二甲苯透明后用中性樹膠封片，并對每張免疫組化染色切片進(jìn)行評分。

8.根據(jù)權(quán)利要求3-7任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于：每種蛋白表達(dá)高低的cut-off值由X-tile軟件確定，其中δ-catenin的cut-off值是7分，Dynamin-2的cut-off值是4分，Erbin的cut-off值是1分，LAP-1的cut-off值是4分。

9.根據(jù)權(quán)利要求3-8任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于：每例標(biāo)本在應(yīng)用4種抗體分別檢測后，其4種蛋白聯(lián)合表達(dá)的計(jì)算公式為Y＝α×A+β×B+γ×C+δ×D，其中α、β、γ、δ為系數(shù)，可以通過Cox回歸得出，故該公式轉(zhuǎn)換為Y＝0.367×A+0.349×B+0.556×C+0.410×D；A、B、C、D分別為該例標(biāo)本中δ-catenin、Dynamin-2、Erbin、LAP-1蛋白的表達(dá)狀態(tài)，1代表低表達(dá)，2代表高表達(dá)；在計(jì)算出每例標(biāo)本的Y值后按照從小到大的順序排列，其中位于中間位置的標(biāo)本所對應(yīng)的Y值為cut-off值，即2.092，那么低于該值的病例為低危組，高于該值的病例為高危組。

10.根據(jù)權(quán)利要求3-9任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于：評價(jià)個(gè)體食道癌患者預(yù)后的信息時(shí)，只需把該患者4個(gè)蛋白的免疫組化得分所對應(yīng)的表達(dá)狀態(tài)套入公式中，就可以得出Y值，然后與我們確定的cut-off值2.092比較，小于該值的患者屬于低危組，其3年生存率為40.74％，而大于該值的患者屬于高危組，其3年生存率為21.13％。