[發(fā)明專利]一種黃粉蟲胰蛋白酶樣酶基因核苷酸序列及克隆方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410201202.2
• 申請日: 2014-05-14
• 公開（公告）號: CN104131016A
• 公開（公告）日: 2014-11-05
• 發(fā)明（設計）人: 韓雅莉;譚竹鈞;葉韻;于曉謙
• 申請（專利權）人: 廣東工業(yè)大學
• 主分類號: C12N15/57
• 分類號: C12N15/57;C12N15/10
• 代理公司: 廣州市南鋒專利事務所有限公司 44228
• 代理人: 劉媖

技術領域

本發(fā)明涉及本發(fā)明涉及一種胰蛋白酶樣酶基因核苷酸序列及克隆方法，具體涉及本發(fā)明涉及一種黃粉蟲胰蛋白酶樣酶基因核苷酸序列及克隆方法，屬于基因工程技術領域。?

背景技術

黃粉蟲（Tenebrio?molitor?L.），又名大黃粉蟲，屬昆蟲綱，鞘翅目。隨著近年來研究人員的研究發(fā)現(xiàn)：黃粉蟲的體內含有較多的蛋白質、氨基酸、脂肪、微量元素和維生素等多種化學物質，并經(jīng)實驗證明，以黃粉蟲為原料制成的保健品具有抗病、防病的功能。?

黃粉蟲幼蟲的研究只有30年左右，研究還不深入。國內對其的研究主要集中在飼料中應用，作為一種高蛋白營養(yǎng)品，對蛋白的功能以及功能性蛋白的研究較少。在國外，開始對黃粉蟲絲氨酸胰蛋白酶樣酶的提取、功能以及其基因方面的研究，但是研究的還不夠深入。?

絲氨酸蛋白酶(?serine?protease，SP)?是一類以絲氨酸為活性中心的蛋白水解酶家族，包括胰蛋白酶、凝血酶、纖溶酶以及組織纖溶酶原激活劑等．?SP?活性中心都含?Ser、His、Asp，并具有相同的催化機制。該家族成員在生物體內執(zhí)行著多種重要生理功能，如食物消化、血?壓?調?節(jié)、凝?血、纖溶以及發(fā)育等。昆蟲的胰蛋白酶(?trypsin)?是其體內最重要的消化酶，大多數(shù)昆蟲的此類酶存在于中腸。也有研究發(fā)現(xiàn)，處于不同發(fā)育階段和不同性別的昆蟲其胰蛋白酶存在有所差異，如云杉色卷蛾?(?Choristoneura?fumiferana?Clemens?)?、煙草天蛾?(?Mandula?sexta?Linnaeus)?等胰蛋白酶僅存在于幼蟲中腸中；而在各個發(fā)育階段的雌、雄黑腹果蠅(?Drosophila?melanogaster?Meigen?)中腸中均有高活性胰蛋白酶。研究表明，雖然昆蟲的胰蛋白酶樣酶與脊椎動物的胰蛋白酶在分泌與激活機制上有所不同，但其構成與作用機理很相似，如都含有信號肽，N?端都具有?IVGG?的氨基酸序列等。?

據(jù)報道，黃粉蟲胰蛋白酶樣蛋白具有溶解纖維蛋白的作用。但是來源于生物體內的纖溶活性蛋白受到生物體來源和分離純化過程繁瑣的限制，使之不能大量獲得和應用，若將該蛋白的基因克隆出來即可用基因工程的方法大量獲得該蛋白。中國專利CN101838659A公開了一種擬穴青蟹胰蛋白酶基因cDNA序列及其克隆方法和應用，用于預測青蟹種苗繁育過程中的投餌量以及蛻殼周期，以滿足人們對青蟹生活周期的掌握以及遺傳育種中的選用，效果好。而對黃粉蟲胰蛋白酶樣酶基因核苷酸序列及克隆方法還沒出現(xiàn)。本發(fā)明的目的是提供一種黃粉蟲胰蛋白酶樣酶基因核苷酸序列及克隆方法，得到高質量，高產(chǎn)量的活性物質，在醫(yī)療上將具有較好的應用前景。?

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的是提供一種黃粉蟲胰蛋白酶樣酶基因核苷酸序列及克隆方法，得到質量優(yōu)良，產(chǎn)量高的活性物質。?

為了解決上述問題，本發(fā)明所采用的技術方案是：?

一種黃粉蟲胰蛋白酶樣酶基因核苷酸序列，其cDNA序列由869個核苷酸組成，自5’至3’端序列為：