[發明專利]酶法降解滸苔多糖的方法

有效

• 申請號: 201410200699.6
• 申請日: 2014-05-13
• 公開（公告）號: CN103951761A
• 公開（公告）日: 2014-07-30
• 發明（設計）人: 周濤;許莉莉
• 申請（專利權）人: 浙江工商大學
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00
• 代理公司: 杭州中成專利事務所有限公司 33212
• 代理人: 金祺

技術領域

本發明屬于食品生物技術領域，涉及一種酶法降解滸苔多糖的方法。

背景技術

滸苔是我國東南沿海的一種大型經濟性綠藻，資源豐富，本身可以食用，并含有多種活性物質，如滸苔多糖，脂類色素，酚類等。據文獻報道，滸苔多糖具有提高哺乳動物免疫力、降血脂、消炎抗菌以及抗氧化等生理功能。因此將滸苔開發成功能食品有很好的前景。滸苔水提多糖主要為水溶性的硫酸多糖，其組成主要是葡萄糖醛酸-木糖-鼠李糖聚合物。滸苔多糖分子量大，如果將其降解成分子量相對較小的產物，則由于游離出更多的活性基團，能會使其生物活性得到提高。

據報道，滸苔多糖糖鍵類型主要是β-1,4、α-1,2、α-1,4、α-1,2,4和β-1,6，還含有較少量的β-1,3和α-1,3糖苷鍵。

酸降解是多糖降解的傳統方法，可通過調節酸度、溫度和作用時間得到不同降解程度的水解產物。但硫酸多糖在降解過程中其硫酸基易被水解脫落，硫酸基含量的降低會導致多糖的生理活性降低；該方法的降解率為40.05％；分子量范圍一般為5.32～95.6kDa。

氧化降解雖可減少多糖在降解過程中的硫酸基脫落，但氧化產物相對較復雜，增加了分離純化的難度。該方法的降解率為61.32％；分子量范圍一般為2.28～55.9kDa。

酶法降解作用條件溫和，也可避免硫酸基的脫落，但不易得到水解效率高的酶。但目前對滸苔多糖的酶法降解很少有見報道。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種水解效率高、體外抗氧化活性好的酶法降解滸苔多糖的方法。

為了解決上述技術問題，本發明提供一種酶法降解滸苔多糖的方法，將滸苔粗多糖或滸苔多糖配置成濃度為1～20mg/mL(較佳為4～6mg/mL)的多糖溶液；然后以糖化酶(葡萄糖淀粉酶)作為水解酶，在多糖溶液中加入糖化酶直至糖化酶的終濃度為2～100U/mL(較佳為10～20U/mL)；于pH為3.5～5.5、溫度為40～60℃反應1～5小時(較佳為于pH為4.5，49℃反應2小時)，得首次酶解降解多糖溶液；將首次酶解降解多糖溶液煮沸4～6分鐘后，離心以除去糖化酶，得含有首次酶解降解后滸苔多糖的上清液。

備注說明：將滸苔粗多糖或滸苔多糖配置成濃度為1～20mg/mL的多糖溶液，即為：當選用滸苔粗多糖時，滸苔粗多糖的濃度為1～20mg/mL；當選用滸苔多糖時，滸苔多糖的濃度為1～20mg/mL。

離心是指：7000～9000r/s離心4～6min。

作為本發明的酶法降解滸苔多糖的方法的改進：將含有首次酶解降解后滸苔多糖的上清液用截留分子量為500的透析袋透析，以除去無機鹽；得透析液；將透析液冷凍干燥，得粉末狀的酶解降解滸苔多糖(分子量較低，分子量范圍為7.2～122kDa之間)。

備注說明：上述透析時間為20～28小時；冷凍干燥是指在-45～-55℃干燥20～28小時。

作為本發明的酶法降解滸苔多糖的方法的另一種改進：將含有首次酶解降解后滸苔多糖的上清液進行再次水解，所述再次水解包括如下步驟：

在含有首次酶解降解后滸苔多糖的上清液中加入果膠酶，所述果膠酶的用量為滸苔粗多糖或滸苔多糖重量的1～10％(較佳為6～9％)；于pH為3.5～5.5、溫度為45～60℃反應1～5小時(較佳為pH為4.5，溫度為56℃反應3小時)，得再次酶解降解多糖溶液；將再次酶解降解多糖溶液煮沸4～6分鐘后，離心以除去果膠酶，得含有再次酶解降解后滸苔多糖的上清液。

備注說明：果膠酶的酶活為30U/mg。離心是指：7000～9000r/s離心4～6min。

作為本發明的酶法降解滸苔多糖的方法的進一步改進：

將含有再次酶解降解后滸苔多糖的上清液用截留分子量為500的透析袋透析，以除去無機鹽；得透析液；將透析液冷凍干燥，得粉末狀的酶解降解滸苔多糖(分子量較低，分子量范圍為7.2～122kDa之間)。

備注說明：上述透析時間為20～28小時；冷凍干燥是指在-45～-55℃干燥20～28小時。

在本發明中，可用pH3.5～5.5的乙酸-乙酸鈉緩沖液進行pH值的調節控制。

本發明所使用的滸苔粗多糖的純度(質量含量)為75～80％。

在本發明中，滸苔粗多糖或滸苔多糖均可通過公知技術獲得，例如，滸苔粗多糖也可通過如下方法制備而得：

1)、將干燥(含水率≤8.21％，質量％)后的滸苔用搗碎機進行粉碎，過120目篩，得滸苔粉末。

2)、乙醇除雜：