[發明專利]一種制備葫蘆素B的方法

有效

• 申請號: 201410200300.4
• 申請日: 2014-05-13
• 公開（公告）號: CN103992366A
• 公開（公告）日: 2014-08-20
• 發明（設計）人: 劉素香;劉毅;白雪;陳常青
• 申請（專利權）人: 天津藥物研究院
• 主分類號: C07J9/00
• 分類號: C07J9/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于醫藥技術領域，涉及一種天然產物葫蘆素B的制備方法，具體涉及一種從植物中提取制備葫蘆素B的方法。

背景技術

葫蘆素B(Cucurbitacin?B)，異名葫蘆苦素B，Amarin，Fabacein?II，分子式C₃₂H₄₆O₈，分子量542.75。

化學結構式

葫蘆素B普遍存在于葫蘆科多種植物中，目前市場上銷售的葫蘆素制劑中的葫蘆素來源于葫蘆科植物甜瓜(Cucumis?melo?L.)的干燥成熟果柄。

葫蘆素B具有抗肝炎和抗腫瘤等生理活性。

現有技術中，多采用有機溶劑回流、滲漉提取和生物酶等提取法(專利“一種葫蘆素B的提取分離方法”，申請號200910154837.0和專利“一種提取葫蘆素B的方法”申請號201010235780.X)得到總葫蘆素提取物，再通過大孔樹脂柱或活性碳氧化鋁柱等分離純化手段獲得。但這些方法在由植物提取一步中消耗大量溶劑，生產過程中污染嚴重，得到的提取物中雜質含量高，后續分離純化過程復雜，不適于大生產。

發明內容

本發明的目的在于提供一種提取制備葫蘆素B的新方法。

本發明是通過以下技術方案實現的：

采用超臨界流體萃取法得到總葫蘆素提取物，具體步驟包括：

1)將甜瓜蒂粉碎，過40目篩，置于萃取釜中，設定萃取壓力10～35MPa，萃取溫度30～55℃，解析釜I溫度為35～60℃，解析釜II溫度為室溫，解析釜I、II壓力均為系統壓力，靜態萃取10～30min后，再動態萃取10～30min(頻率35KHz)，從解析釜I出料口得樣品I；

2)從攜帶劑罐中加入2～5倍藥材量(V/W)的有機溶劑，設定萃取壓力20～45MPa，萃取溫度35～70℃，解析釜I溫度為40～75℃，解析釜II溫度為35～70℃，解析釜I、II壓力均為系統壓力，動態萃取30～60min(頻率35KHz)從解析釜I出料口得萃取液。減壓回收溶劑并濃縮至稠膏，得到樣品II。

3)從富含總葫蘆素提取物的樣品I、樣品II分離純化得到葫蘆素B。

其中，攜帶劑罐中加入的有機溶劑為乙醇和/或醋酸乙酯或/丙酮。

葫蘆素B的分離純化方法為采用閃式硅膠和總葫蘆素提取物混合，用三氯甲烷潤濕，拌樣，揮干溶劑，上樣裝柱，用有機溶劑系統快速洗脫閃式硅膠色譜柱(200～300)，收集洗脫液，根據TLC檢測結果合并洗脫液，回收洗脫液，用乙醇溶解，放置，析晶。即得葫蘆素B，含量大于90.0％。

有機溶劑洗脫系統為石油醚-醋酸乙酯(1:0.5～1)，優選石油醚-醋酸乙酯(3:2)，或三氯甲烷-醋酸乙酯(1:0.5～1)，優選三氯甲烷-醋酸乙酯(1:0.7)。

TLC檢測采用GF254硅膠板，展開劑為三氯甲烷-醋酸乙酯(3:2)和石油醚-醋酸乙酯(1:1)。

葫蘆素B的分離純化方法也可以為采用制備HPLC法，所采用的制備色譜柱填料為正相硅膠柱也可以為反相C₁₈(5～15μm)，流動相正相系統為石油醚-乙酸乙酯，反相系統采用甲醇-水溶液，收集葫蘆素B色譜峰洗脫液，回收洗脫液，濃縮，即得葫蘆素B，含量大于95.0％。

在植物提取一步中采用超臨界流體萃取法得到總葫蘆素提取物，這種提取方法，不破壞植物中的天然化合物結構，且不用或用少量溶劑，生產過程中幾乎無污染，得到的提取物中雜質含量低，有利于進一步的分離純化。對得到的總葫蘆素提取物采用閃式硅膠柱層析分離，洗脫系統用量少，毒性極低，適合大生產操作。葫蘆素B的含量大于90.0％，且收率高。

具體實施方式

實施例1：

取甜瓜蒂2kg，粉碎，過40目篩，置于萃取釜中，設定萃取壓力15MPa，萃取溫度40℃，解析釜I溫度為45℃，解析釜II溫度為室溫，解析釜I、II壓力均為系統壓力，靜態萃取15min后，再動態萃取25min(頻率35KHz)，從解析釜I出料口得樣品I；2)從攜帶劑罐中加入2倍藥材量(V/W)的乙醇，設定萃取壓力25MPa，萃取溫度45℃，解析釜I溫度為50℃，解析釜II溫度為45℃，解析釜I、II壓力均為系統壓力，動態萃取30min(頻率35KHz)從解析釜I出料口得萃取液。減壓回收溶劑并濃縮至稠膏，得到樣品II。將I和II合并，即得總葫蘆素提取物。