[發明專利]一種具有抗凝血土元多肽及其酶解制備方法與應用

有效

• 申請號: 201410199228.8
• 申請日: 2014-05-12
• 公開（公告）號: CN104004807B
• 公開（公告）日: 2017-06-06
• 發明（設計）人: 吳暉;任堯;賴富饒;李曉鳳
• 申請（專利權）人: 華南理工大學
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K4/12;C07K1/22;A61K38/17;A61P7/02;A23L33/00
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司44102
• 代理人: 何淑珍

1.一種具有抗凝血土元多肽的酶解制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

取500g土元干粉，干粉與水的比例為15g：100 mL，pH調至9.0，以300r/min的速度均勻攪拌2h，取上清液，再將pH調至4.6，最后得到蛋白沉淀，將其pH調至7.0，干燥，制得土元蛋白；將土元蛋白加入水中溶解，蛋白與水的比例為10 g：100 mL，控制pH值在8.5，再加入Alcalase 2.4L堿性蛋白酶，酶體積與土元蛋白重量之比為2.0 mL：100 g，反應溫度為60℃，攪拌速度為200 r/min，反應時間 2.5h；煮沸10min，將酶解液過大孔吸附樹脂DA 201-C交換柱，從純凈水開始逐漸增大乙醇濃度，以0, 25, 50, 75, 100%不同濃度乙醇進行梯度洗脫，流速控制在1.0 mL/min，在波長214 nm處測定吸光度，以吸收峰來分別收集75%乙醇洗脫組分洗脫液，冷凍干燥得抗凝血的土元多肽。