[發明專利]一種水蛭高F值寡肽及其酶解制備方法與應用

有效

• 申請號: 201410198756.1
• 申請日: 2014-05-12
• 公開（公告）號: CN104004087A
• 公開（公告）日: 2014-08-27
• 發明（設計）人: 吳暉;任堯;賴富饒;楊祎靜;李曉鳳
• 申請（專利權）人: 華南理工大學
• 主分類號: C07K14/815
• 分類號: C07K14/815;C12P21/06;A23L1/29;C07K1/18
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 何淑珍

1.一種水蛭高F值寡肽的酶解制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）將水蛭干燥體用清水洗凈，并于去離子水中浸泡8~24h，再于分析純乙醇中浸泡8~24h，干燥粉碎，得到水蛭干粉，置于-4~-20℃冷藏備用；

（2）稱步驟（1）得到的水蛭干粉，加水溶解，按干粉與水重量比為1~8：100配制懸濁液，調整pH?至8~11，浸泡10~60min，再調節pH至7.5~11，加入堿性蛋白酶，反應溫度保持在30~80℃，酶解1~6h；煮沸5~30min，滅酶活，冷卻，4000~10000r/min離心5~20min，收集上清液，調節pH至7~10，加入木瓜蛋白酶，反應溫度保持在25~80℃，酶解1~6h；煮沸5~30min，滅酶活，冷卻，4000~10000r/min離心5~20min，收集上清液，調整pH至2~7，按活性炭重量與上清液體積比0.2~20g：100mL加入活性炭，在25~60℃下吸附30~100min，4000~10000r/min離心5~30min，收集上清液，過凝膠過濾層析，以去離子水洗脫，收集在214nm吸收值大于2，在280nm吸收值小于0.2，分子量在300—1500Da的洗脫液，富集濃縮，冷凍干燥，得到水蛭高F值寡肽。

2.根據權利要求1所述的水蛭高F值寡肽的酶解制備方法，其特征在于：所述的水蛭為寬體金線蛭Whitmania?Pigra。

3.根據權利要求1所述的水蛭高F值寡肽的酶解制備方法，其特征在于：步驟（1）和步驟（2）中所述pH調至以8~11，調節pH至7.5~11，調節pH至7~10具體為：用0.1-2mol/L?NaOH將pH調至所述pH值；所述收集上清液，調整pH至2~7具體為：用0.1-2mol/L的HCl將pH調至2~7。

4.根據權利要求1所述的水蛭高F值寡肽的酶解制備方法，其特征在于：所添加的堿性蛋白酶為Alcalase2.4L，酶活力3.9323×10⁵U/mL，所添加的木瓜蛋白酶為Papain，酶活力0.8231×10⁵U/g。

5.根據權利要求1所述的水蛭高F值寡肽的酶解制備方法，其特征在于：所述堿性蛋白酶添加量為4000~15000U/g?pro，所述木瓜蛋白酶添加量為按2000~10000U/g?pro。

6.根據權利要求1所述的水蛭高F值寡肽的酶解制備方法，其特征在于：所述堿性蛋白酶添加量為6000~13000U/g?pro，所述木瓜蛋白酶添加量為2000~8000U/g?pro。

7.根據權利要求1所述的水蛭高F值寡肽的酶解制備方法，其特征在于：所添加的活性炭為針劑型活性炭，添加活性炭重量與上清液體積比為0.5~10g：100mL。

8.根據權利要求1所述的水蛭高F值寡肽的酶解制備方法，其特征在于：步驟（2）中所述凝膠填料為Sephadex?G-15。

9.由權利要求1-8任意一項所述的制備方法制備得到水蛭高F值寡肽，其特征在于：所述水蛭高F值寡肽的分子量在300—1500Da；所述F值為20.0—30.0。

10.權利要求9所述的水蛭高F值寡肽應用于制備高F值寡肽功能性食品，所述功能性食品為粉劑、片劑、口服液或膠囊。