[發(fā)明專利]包含優(yōu)良事件EE-GH6的抗蟲(chóng)棉花植物及其鑒定方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410197796.4
• 申請(qǐng)日: 2008-06-09
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103937904A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-07-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: L·特落林德?tīng)?/a>;S·莫昂;V·哈貝克斯;D·佩林克;E·貝格曼
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 拜爾作物科學(xué)公司
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;C12N15/11;C12N15/29
• 代理公司: 北京市中咨律師事務(wù)所 11247
• 代理人: 凌立;黃革生

本申請(qǐng)是發(fā)明人于2008年6月9日提交的題為“包含優(yōu)良事件EE-GH6的抗蟲(chóng)棉花植物及其鑒定方法”的中國(guó)專利申請(qǐng)200880019547.9的分案申請(qǐng)。

發(fā)明領(lǐng)域

本發(fā)明涉及轉(zhuǎn)基因棉花植物、植物材料及種子，其特征在于包含一個(gè)特定的轉(zhuǎn)化事件，尤其涉及在棉花基因組的特定部位存在編碼可賦予昆蟲(chóng)抗性的蛋白質(zhì)的基因。本發(fā)明的棉花植物組合了昆蟲(chóng)抗性表型、農(nóng)學(xué)性狀、遺傳穩(wěn)定性以及對(duì)不同遺傳背景的適應(yīng)性(等同于非轉(zhuǎn)化棉花品系在無(wú)昆蟲(chóng)狀況下)。本發(fā)明進(jìn)一步提供了在生物樣品中鑒定特別包含了轉(zhuǎn)化事件EE-GH6的植物材料的存在的方法和試劑盒。

發(fā)明背景

植物中轉(zhuǎn)基因的表型表達(dá)取決于：基因本身的結(jié)構(gòu)以及其在植物基因組中的位置。同時(shí)，在基因組不同位置的轉(zhuǎn)基因(作為外源DNA)的存在將以不同的方式影響植物的整體表型。通過(guò)遺傳操作，在農(nóng)學(xué)上或工業(yè)上成功地將商業(yè)上感興趣的性狀引入到植物中是一個(gè)長(zhǎng)期的過(guò)程，這取決于不同的因素。基因轉(zhuǎn)化的植物的實(shí)際轉(zhuǎn)化和再生僅僅是一系列選擇步驟的第一步，選擇步驟包括廣泛的遺傳表征、育種和田間試驗(yàn)評(píng)價(jià)，最終實(shí)現(xiàn)優(yōu)良事件(elite?event)的選擇。

棉纖維是全世界最重要的紡織原料。全球每年收獲大約八千萬(wàn)英畝棉花。就面積產(chǎn)量而言，棉花是美國(guó)第五大作物，2000年其種植超過(guò)了一千五百萬(wàn)英畝。

以棉花為食的最具破壞性的昆蟲(chóng)物種有：谷實(shí)夜蛾(Helicoverpa?zea?(玉米果穗螟蛉或棉鈴蟲(chóng)))、棉鈴蟲(chóng)(Helicoverpa?armigera(美洲棉鈴蟲(chóng)))、煙芽夜蛾(Heliothis?virescens(煙青蟲(chóng)))及斑實(shí)夜蛾(Helicoverpa?punctigera)。

鑒于對(duì)新型食品和新型飼料的關(guān)注，GMO和非GMO產(chǎn)品的分開(kāi)，以及對(duì)專利材料的鑒別，優(yōu)良事件的明確鑒定正變得愈加重要。理想的是，該鑒定方法既快捷又簡(jiǎn)單，還不需要大量的實(shí)驗(yàn)室設(shè)備。此外，該方法應(yīng)提供不需專家解釋就能使優(yōu)良事件明確確定的結(jié)果，但是如果必要的話，在專家仔細(xì)審查下，結(jié)果被證明有效。本文描述了用于在生物樣品中鑒定優(yōu)良事件EE-GH6的特定工具。

在開(kāi)發(fā)棉花(Gossypium?hirsutum)過(guò)程中，從轉(zhuǎn)基因棉花植物群體中將EE-GH6鑒定作為優(yōu)良事件，其包含編碼來(lái)自蘇云金芽孢桿菌(Bacillus?thuringiensis)的殺蟲(chóng)晶體蛋白的基因。轉(zhuǎn)基因棉花植物包含編碼Bt殺蟲(chóng)晶體蛋白(如WO02/057664所述)的嵌合基因，其處于植物可表達(dá)啟動(dòng)子的控制之下。

包含抗蟲(chóng)基因的棉花植物已經(jīng)在本領(lǐng)域中公開(kāi)。但是，并沒(méi)有任何現(xiàn)有技術(shù)公開(kāi)內(nèi)容教導(dǎo)或提示了本發(fā)明。

發(fā)明概述

本發(fā)明涉及轉(zhuǎn)基因棉花植物，或其種子、細(xì)胞或組織，其包含穩(wěn)定整合在其基因組中的表達(dá)盒，該表達(dá)盒包含含有cry2Ae基因編碼序列的抗蟲(chóng)基因(如本文實(shí)施例1.1所述)，其為抗蟲(chóng)的，在無(wú)昆蟲(chóng)壓力下，該轉(zhuǎn)基因植物及其種子、細(xì)胞或組織具有與非轉(zhuǎn)基因的同基因系基本上相當(dāng)?shù)霓r(nóng)學(xué)性能。在有昆蟲(chóng)壓力下，該轉(zhuǎn)基因植物將具有比非轉(zhuǎn)基因植物優(yōu)越的農(nóng)學(xué)表型。

根據(jù)本發(fā)明，棉花植物，或其種子、細(xì)胞或組織包含優(yōu)良事件EE-GH6。

更確切地說(shuō)，本發(fā)明涉及轉(zhuǎn)基因棉花植物、其種子、細(xì)胞或組織，其基因組DNA的特征在于，當(dāng)使用兩個(gè)分別針對(duì)EE-GH6的5’或3’側(cè)翼區(qū)和外源DNA的引物，用本文所述的PCR鑒定方法分析時(shí)，得到EE-GH6特異的片段。所述引物可以分別針對(duì)SEQ?ID?No：1或SEQ?ID?No：11內(nèi)的5’側(cè)翼區(qū)和外源DNA，例如引物可以分別包含SEQ?ID?No：5和SEQ?ID?No：7的核苷酸序列或由其組成，得到100-700bp的DNA片段，優(yōu)選大約197bp。該引物也可以分別針對(duì)SEQ?ID?No：2內(nèi)的3’側(cè)翼區(qū)和外源DNA，例如引物可以分別包含SEQ?ID?No：4和SEQ?ID?No：3的核苷酸序列或由其組成，得到100-700bp的DNA片段，優(yōu)選是大約189bp。