[發明專利]包含優良事件EE-GH6的抗蟲棉花植物及其鑒定方法

有效

• 申請號: 201410197796.4
• 申請日: 2008-06-09
• 公開（公告）號: CN103937904A
• 公開（公告）日: 2014-07-23
• 發明（設計）人: L·特落林德爾;S·莫昂;V·哈貝克斯;D·佩林克;E·貝格曼
• 申請（專利權）人: 拜爾作物科學公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11;C12N15/29
• 代理公司: 北京市中咨律師事務所 11247
• 代理人: 凌立;黃革生

1.鑒定生物樣品中下述外源DNA的存在的方法，所述外源DNA包含處于花椰菜花葉病毒35S啟動子控制下，與Rubisco小亞基轉運肽有效連接的經修飾cry2Ae基因的編碼序列，所述外源DNA側接5’側翼區，所述5’側翼區位于該外源DNA的緊上游區并與之相鄰，所述5’側翼區具有SEQ?ID?No1的1-140位核苷酸的核苷酸序列，或SEQ?ID?No11的1-463位核苷酸的核苷酸序列；所述外源DNA側接3’側翼區，所述3’側翼區位于該外源DNA的緊下游區并與之相鄰，所述3’側翼區具有SEQ?ID?No2的113-438的核苷酸序列的互補序列，其中側接所述5’和3’側翼區的所述外源DNA存在于以保藏號PTA-8398保藏在ATCC的參考種子中(“EE-GH6”)，該方法包括用特異識別EE-GH6的5’或3’側翼區的特異引物或探針檢測EE-GH6特異性區域，所述方法包括：

a)利用聚合酶鏈式反應用至少兩種引物從存在于所述生物樣品中的核酸擴增100到500bp的DNA片段，所述引物具有17-50長的核苷酸，其中

(i)所述引物之一由SEQ?ID?No1的1-140位核苷酸的17-50個核苷酸的核苷酸序列的部分序列組成，或由SEQ?ID?No11的1-463位核苷酸的17-50個核苷酸的核苷酸序列的部分序列組成；所述引物中的另外一條引物由SEQ?ID?No1的141-192位核苷酸的互補核苷酸序列的17-50個核苷酸的部分序列組成，或

(ii)所述引物之一由SEQ?ID?No2的113-438位核苷酸的17-50個核苷酸的核苷酸序列的部分序列組成；所述引物中的另外一條引物由SEQ?ID?No2的1-112位核苷酸的17-50個核苷酸的核苷酸序列的部分序列組成；或

b)將生物樣品的核酸與EE-GH6的特異探針雜交，其中所述特異探針由具有SEQ?ID?No1的120-160位核苷酸的序列的SEQ?ID?No1部分序列組成，或具有SEQ?ID?No2的102-123位核苷酸的SEQ?ID?No2部分序列組成。

2.用于鑒定生物樣品中優良事件EE-GH6的試劑盒，所述試劑盒包含：

(a)由SEQ?ID?No1的1-140位核苷酸的17-50個核苷酸的核苷酸序列的部分序列組成的一條引物，或由SEQ?ID?No11的1-463位核苷酸的17-50個核苷酸的核苷酸序列的部分序列組成的一條引物；以及由SEQ?ID?No1的141-192位核苷酸的互補核苷酸序列的17-50個核苷酸的部分序列組成的另外一條引物，或

(b)由SEQ?ID?No2的113-438位核苷酸的17-50個核苷酸的核苷酸序列的部分序列組成一條引物；以及由SEQ?ID?No2的1-112位核苷酸的17-50個核苷酸的核苷酸序列的部分序列組成的另外一條引物。

3.適合用于EE-GH6特異檢測的引物對，所述引物對選自：

(a)由SEQ?ID?No1的1-140位核苷酸的17-50個核苷酸的核苷酸序列的部分序列組成的一條引物，或由SEQ?ID?No11的1-463位核苷酸的17-50個核苷酸的核苷酸序列的部分序列組成的一條引物；以及由SEQ?ID?No1的141-192位核苷酸的互補核苷酸序列的17-50個核苷酸的部分序列組成的另外一條引物，和

(b)由SEQ?ID?No2的113-438位核苷酸的17-50個核苷酸的核苷酸序列的部分序列組成一條引物；以及由SEQ?ID?No2的1-112位核苷酸的17-50個核苷酸的核苷酸序列的部分序列組成的另外一條引物。

4.用于鑒定生物樣品中優良事件EE-GH6的試劑盒，所述試劑盒包含由具有SEQ?ID?No1的120-160位核苷酸之間的序列的SEQ?ID?No1部分序列組成的特異引物，或由具有SEQ?ID?No2的102-123位核苷酸的SEQ?ID?No2部分序列組成的特異引物。

5.用于鑒定生物樣品中優良事件EE-GH6的特異引物，其中所述引物由具有SEQ?ID?No1的120-160位核苷酸之間的序列的SEQ?ID?No1部分序列組成，或由具有SEQ?ID?No2的102-123位核苷酸的SEQ?ID?No2部分序列組成。

6.用于鑒定生物樣品中優良事件EE-GH6的特異引物，所述引物的序列由SEQ?ID?No1的120-161位核苷酸序列或其互補序列組成。