[發(fā)明專利]雞新城疫糖蛋白病毒抗原的制備方法及其產(chǎn)品

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410196203.2
• 申請日: 2014-05-09
• 公開（公告）號: CN104059927B
• 公開（公告）日: 2018-01-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張志芳;李軼女;王智權(quán);易詠竹;李浩洋;李田田;胡小元
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所
• 主分類號: C12N15/45
• 分類號: C12N15/45;C12N15/56;C12N15/866;C12N9/24;C12N7/01;C07K14/125;A61K39/17;A61P31/14
• 代理公司: 北京思元知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)11598
• 代理人: 余光軍

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種雞新城疫病毒抗原的制備方法，尤其涉及利用重組桿狀病毒在昆蟲體內(nèi)制備雞新城疫病毒抗原的方法以及由該制備方法得到重組抗原，本發(fā)明還涉及一種雞新城疫病毒抗原基因家蠶桿狀病毒呈遞載體的制備方法及其產(chǎn)品，本發(fā)明進(jìn)一步涉及它們在預(yù)防、治療或診斷雞新城疫疫苗或試劑中的用途，屬于雞新城疫病毒抗原的制備和應(yīng)用領(lǐng)域。

背景技術(shù)

新城疫于1926年首先發(fā)現(xiàn)于印度尼西亞，同年發(fā)現(xiàn)于英國的新城，由于新城疫危害嚴(yán)重，國際獸疫局(OIE)把新城疫定為烈性傳染病，給養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大經(jīng)濟(jì)損失。世界動物衛(wèi)生組織將其列為必須報告的動物疫病。因此，尋找一種理想的免疫保護(hù)性抗原用于該病的快速診斷與免疫防治十分迫切。

隨著桿狀病毒作為載體，在體外和體內(nèi)轉(zhuǎn)導(dǎo)動物細(xì)胞并獲得目的蛋白的高效表達(dá)，桿狀病毒日益顯示了其作為非復(fù)制型載體在基因治療中的應(yīng)用前景，開辟了桿狀病毒應(yīng)用研究的新領(lǐng)域(Hiiser A.Am J Pharmacogenomies,3(1):53-63,2003)。從桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)建立以來，已有1000多種外源基因在這一系統(tǒng)中得到了表達(dá)。1985年，Maeda用家蠶Bombyx mori NPV作表達(dá)載體，在家蠶體內(nèi)高水平地表達(dá)出人α干擾素以來，以中國和日本為代表的有蠶國家，不斷發(fā)展家蠶桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)，已成為比較成熟的一種蛋白表達(dá)技術(shù)(呂鴻聲.昆蟲病毒分子生物學(xué)免疫研究,1998)。與細(xì)菌、酵母、哺乳動物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)相比，家蠶桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)在一定方面具有許多優(yōu)勢，因此充分利用家蠶資源來生產(chǎn)外源蛋白，對生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)具有重要意義。但是，至今尚無利用家蠶桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)在昆蟲體內(nèi)成功表達(dá)雞新城疫病毒抗原的報道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種利用家蠶桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)在昆蟲體內(nèi)表達(dá)雞新城疫病毒抗原的方法。

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的：

本發(fā)明提供了一種雞新城疫病毒抗原的制備方法，包括以下步驟：

(1)將雞新城疫病毒的糖蛋白基因F或優(yōu)化后的雞新城疫病毒的糖蛋白基因F-O克隆到桿狀病毒運載載體中，構(gòu)建得到轉(zhuǎn)移表達(dá)載體；或者將雞新城疫病毒血凝素神經(jīng)氨酸酶基因HN或優(yōu)化后的雞新城疫病毒血凝素神經(jīng)氨酸酶基因HN-O克隆到桿狀病毒運載載體中，構(gòu)建得到轉(zhuǎn)移表達(dá)載體；或者將雞新城疫病毒的糖蛋白基因F或優(yōu)化后的雞新城疫病毒的糖蛋白基因F-O與雞新城疫病毒血凝素神經(jīng)氨酸酶基因HN或優(yōu)化后的雞新城疫病毒血凝素神經(jīng)氨酸酶基因HN-O串聯(lián)在一起的序列克隆到桿狀病毒運載載體中，構(gòu)建得到轉(zhuǎn)移表達(dá)載體；

(2)將構(gòu)建得到的轉(zhuǎn)移表達(dá)載體與桿狀病毒DNA共轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞以發(fā)生同源重組或轉(zhuǎn)座，獲得重組桿狀病毒；

(3)將重組桿狀病毒感染昆蟲宿主或昆蟲細(xì)胞；培養(yǎng)被感染的昆蟲宿主或昆蟲細(xì)胞，誘導(dǎo)表達(dá)相應(yīng)的雞新城疫病毒抗原；收獲并純化所表達(dá)的抗原。

本發(fā)明還提供了一種雞新城疫病毒抗原基因家蠶桿狀病毒呈遞載體的制備方法，該方法包括以下步驟：

(1)將雞新城疫病毒的糖蛋白基因F或優(yōu)化后的雞新城疫病毒的糖蛋白基因F-O與哺乳動物細(xì)胞啟動子一起克隆到桿狀病毒運載載體中，構(gòu)建得到轉(zhuǎn)移表達(dá)載體；或者將雞新城疫病毒血凝素神經(jīng)氨酸酶基因HN或優(yōu)化后的雞新城疫病毒血凝素神經(jīng)氨酸酶基因HN-O與哺乳動物細(xì)胞啟動子一起克隆到桿狀病毒運載載體中，構(gòu)建得到轉(zhuǎn)移表達(dá)載體；或者優(yōu)化后的雞新城疫病毒的糖蛋白基因F-O與優(yōu)化后的雞新城疫病毒血凝素神經(jīng)氨酸酶基因HN-O串聯(lián)在一起的序列與哺乳動物細(xì)胞啟動子一起克隆到桿狀病毒運載載體中，構(gòu)建得到轉(zhuǎn)移表達(dá)載體；

(2)將構(gòu)建得到的轉(zhuǎn)移表達(dá)載體與桿狀病毒DNA共轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞以發(fā)生同源重組或轉(zhuǎn)座，獲得重組桿狀病毒，將重組桿狀病毒感染昆蟲宿主或昆蟲細(xì)胞擴(kuò)增重組桿狀病毒，即得。