[發(fā)明專利]一種利用殼聚糖∕黃原膠制備雙歧桿菌微膠囊的方法及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410195624.3
• 申請(qǐng)日: 2014-05-09
• 公開（公告）號(hào): CN103992997A
• 公開（公告）日: 2014-08-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳合;宋雅娟;舒國(guó)偉;劉妮娜
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 陜西科技大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N11/10
• 分類號(hào): C12N11/10;C12N11/04;A23C9/123;C12R1/01
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責(zé)任公司 61200
• 代理人: 蔡和平

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于益生菌制品制備技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種利用殼聚糖/黃原膠制備雙歧桿菌微膠囊的方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)

雙歧桿菌(Bifidobacteria)是由法國(guó)Tisser博士從母乳喂養(yǎng)嬰兒的糞便中分離出的一種厭氧菌。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，雙歧桿菌是人體腸道中的一種重要的益生菌，其在腸道中定殖的數(shù)量往往與人的健康狀況存在著關(guān)系。雙歧桿菌作為一種典型的益生菌，可通過改善腸道微生物菌群的平衡而發(fā)揮保健功能，例如具有雙向調(diào)理胃腸的功能，抗癌作用，免疫調(diào)節(jié)功能等。但其對(duì)氧極為敏感，對(duì)低pH值的抵抗力差，活性保持較為困難。

微膠囊技術(shù)具有防止外界環(huán)境因素破壞芯材、有效地控制芯材的釋放、掩蓋芯材的異味、改變芯材的物理和化學(xué)性質(zhì)，使其便于貯藏和運(yùn)輸?shù)茸饔谩＠梦⒛z囊及技術(shù)對(duì)益生菌進(jìn)行包埋，可對(duì)益生菌起到一定的保護(hù)作用，可有效的降低環(huán)境對(duì)菌體的破壞作用。

目前，利用微膠囊包埋技術(shù)保護(hù)雙歧桿菌的報(bào)道很多，大多數(shù)都是利用海藻酸鹽作為包埋壁材使用。在嗜酸乳桿菌包埋過程中，也有其他材料被作為壁材使用。例如，CN10275589A中公開的雙歧桿菌包埋方法中提到，先利用果膠對(duì)菌體進(jìn)行單層包埋，再利用海藻酸鈉進(jìn)行雙層包埋；CN103355656A中也公開一種雙歧桿菌微膠囊，該微膠囊用海藻酸鹽、甲基丙烯酸與甲基丙烯酸甲酯共聚物組成壁材，或是殼聚糖、海藻酸鹽、甲基丙烯酸與甲基丙烯酸甲酯共聚物組成壁材，來對(duì)雙歧桿菌進(jìn)行包埋；CN102210659A中提到的雙歧桿菌微膠囊，是以海藻酸鈉和菌體混合后進(jìn)行乳化，再與氯化鈣進(jìn)行固化；CN102302160A中公開了一種嬰兒雙歧桿菌微膠囊的制備方法，此微膠囊是以食用明膠–樹膠作為壁材，轉(zhuǎn)股酰胺酶作為交聯(lián)劑最終制得微膠囊；文獻(xiàn)“腸溶性雙歧桿菌微膠囊的初步研究”中公開的雙歧桿菌微膠囊是以腸溶性丙烯酸樹脂作為包埋材料。

除以上提到的包埋材料之外，還可以利用殼聚糖與黃原膠的聚電解質(zhì)絡(luò)合作用形成的共混凝膠做為壁材進(jìn)行雙歧桿菌的包埋，制備出的益生菌微膠囊可加入至含果粒的液態(tài)酸奶中，得到新型液態(tài)食品。殼聚糖和和黃原膠都是天然的生物大分子，生物相容性好，無毒副作用。殼聚糖溶于酸性水溶液中帶正電荷，可與帶負(fù)電荷的陰離子多糖黃原膠通過聚電解質(zhì)絡(luò)合作用形成共凝膠，從而作為包埋壁材使用。這種材料的使用可以避免海藻酸鹽材料在使用過程中凝膠不穩(wěn)定的缺陷。目前還沒有利用殼聚糖和黃原膠作為壁材對(duì)雙歧桿菌進(jìn)行包埋的發(fā)明專利，為此，提供一種利用殼聚糖/黃原膠制備雙歧桿菌微膠囊的方法及應(yīng)用是很有必要的。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服上述現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺點(diǎn)，提供一種利用殼聚糖/黃原膠制備雙歧桿菌微膠囊的方法及應(yīng)用，能夠避免壁材在使用過程不穩(wěn)定的影響，提高菌體的包埋產(chǎn)率以及包埋活菌數(shù)。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，一種利用殼聚糖∕黃原膠制備雙歧桿菌微膠囊的方法，包括以下步驟：

1)將雙歧桿菌凍干菌粉接種于MRS肉湯中，在37℃培養(yǎng)條件下MRS活化三次，前兩次以3％～5％的接種量轉(zhuǎn)接，并在37℃的條件下培養(yǎng)22～24h，第三次按照2％～3％的接種量轉(zhuǎn)接，并在37℃的條件下培養(yǎng)18h，后進(jìn)行離心處理并收集菌體，棄去上清液得菌泥，將菌泥與濃度為0.85～0.9％的無菌生理鹽水混合配制成1.2～1.3×10⁹CFU/mL的菌懸液備用；

2)取濃度為0.5～1.1％的黃原膠溶液，滅菌和離心除氣處理后備用；

3)取濃度為0.4～1.3％殼聚糖溶液，調(diào)節(jié)pH至5～5.9備用；

4)取除氧劑溶液，除氧劑溶液中的除氧劑為異抗壞血酸鈉或半胱氨酸鹽酸鹽，過濾除菌后備用；

5)將步驟1)制備的菌懸液和步驟2)制備的黃原膠溶液按照1:(3～10)的質(zhì)量比例混合得到菌膠液，后加入步驟4)制備的除氧劑，除氧劑的添加量按照菌膠液總量的0.03～0.07％加入，混勻后得到雙歧桿菌菌膠液，將雙歧桿菌菌膠液加入磁力攪拌器上的步驟3)制備的殼聚糖溶液中，菌膠液與殼聚糖比例為1:(3～6)，加入后攪拌，獲得微膠囊；

6)待微膠囊完全交聯(lián)后，過濾后洗滌，得到微膠囊的活菌數(shù)為3.0～4.1×10⁹CFU/g雙歧桿菌微膠囊。

所述的步驟1)中離心時(shí)的轉(zhuǎn)速為7000～10000r/min，離心時(shí)間為10～15min。

所述的步驟2)中滅菌處理的溫度為：80～110℃，時(shí)間為10～15min；離心除氣處理的轉(zhuǎn)速為：5000～7000r/min，時(shí)間為10～15min。