[發明專利]一種利用殼聚糖∕黃原膠制備雙歧桿菌微膠囊的方法及應用

有效

• 申請號: 201410195624.3
• 申請日: 2014-05-09
• 公開（公告）號: CN103992997A
• 公開（公告）日: 2014-08-20
• 發明（設計）人: 陳合;宋雅娟;舒國偉;劉妮娜
• 申請（專利權）人: 陜西科技大學
• 主分類號: C12N11/10
• 分類號: C12N11/10;C12N11/04;A23C9/123;C12R1/01
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 蔡和平

1.一種利用殼聚糖∕黃原膠制備雙歧桿菌微膠囊的方法，其特征在于：包括以下步驟：

1)將雙歧桿菌凍干菌粉接種于MRS肉湯中，在37℃培養條件下MRS活化三次，前兩次以3～5％的接種量轉接，并在37℃的條件下培養22～24h，第三次按照2～3％的接種量轉接，并在37℃的條件下培養18h，后進行離心處理并收集菌體，棄去上清液得菌泥，將菌泥與濃度為0.85～0.9％的無菌生理鹽水混合配制成1.2～1.3×10⁹CFU/mL的菌懸液備用；

2)取濃度為0.5～1.1％的黃原膠溶液，滅菌和離心除氣處理后備用；

3)取濃度為0.4～1.3％殼聚糖溶液，調節pH至5～5.9備用；

4)取除氧劑溶液，除氧劑溶液中的除氧劑為異抗壞血酸鈉或半胱氨酸鹽酸鹽，過濾除菌后備用；

5)將步驟1)制備的菌懸液和步驟2)制備的黃原膠溶液按照1:(3～10)的質量比例混合得到菌膠液，后加入步驟4)制備的除氧劑，除氧劑的添加量按照菌膠液總量的0.03～0.07％加入，混勻后得到雙歧桿菌菌膠液，將雙歧桿菌菌膠液加入磁力攪拌器上的步驟3)制備的殼聚糖溶液中，菌膠液與殼聚糖比例為1:(3～6)，加入后攪拌，獲得微膠囊；

6)待微膠囊完全交聯后，過濾后洗滌，得到微膠囊的活菌數為3.0～4.1×10⁹CFU/g雙歧桿菌微膠囊。

2.根據權利要求1所述的一種利用殼聚糖∕黃原膠制備雙歧桿菌微膠囊的方法，其特征在于：所述的步驟1)中離心時的轉速為7000～10000r/min，離心時間為10～15min。

3.根據權利要求1所述的一種利用殼聚糖∕黃原膠制備雙歧桿菌微膠囊的方法，其特征在于：所述的步驟2)中滅菌處理的溫度為：80～110℃，時間為10～15min；離心除氣處理的轉速為：5000～7000r/min，時間為10～15min。

4.根據權利要求1所述的一種利用殼聚糖∕黃原膠制備雙歧桿菌微膠囊的方法，其特征在于：所述的步驟3)中，調節pH值時使用的試劑為濃度為1N的NaOH溶液。

5.根據權利要求1所述的一種利用殼聚糖∕黃原膠制備雙歧桿菌微膠囊的方法，其特征在于：所述的步驟5)中，將將雙歧桿菌菌膠液加入磁力攪拌器上的殼聚糖溶液中的方式為：使用針頭規格為0.45～0.7mm的無菌注射器將雙歧桿菌菌膠液以一滴一滴地方式擠壓入磁力攪拌器上的殼聚糖溶液中；且攪拌時間為30～60min。

6.根據權利要求1所述的一種利用殼聚糖∕黃原膠制備雙歧桿菌微膠囊的方法，其特征在于：所述的步驟6)中，過濾時使用160～200目的紗布過濾；洗滌時使用生理鹽水洗滌若干次。

7.一種利用殼聚糖∕黃原膠制備雙歧桿菌微膠囊的應用，其特征在于：在酸奶中，以0.5％～1％(w/w)的加入量將制備的雙歧桿菌微膠囊加入，獲得含益生菌微膠囊的液態酸奶。