[發(fā)明專利]一種試劑及其在硫化氫檢測中的應(yīng)用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201410194129.0 | 申請日: | 2014-05-08 |
| 公開(公告)號: | CN103937491A | 公開(公告)日: | 2014-07-23 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人: | 霍方俊;陰彩霞 | 申請(專利權(quán))人: | 山西大學(xué) |
| 主分類號: | C09K11/06 | 分類號: | C09K11/06;C07D493/10;G01N21/64 |
| 代理公司: | 山西五維專利事務(wù)所(有限公司) 14105 | 代理人: | 張福增 |
| 地址: | 030006 山*** | 國省代碼: | 山西;14 |
| 權(quán)利要求書: | 查看更多 | 說明書: | 查看更多 |
| 摘要: | |||
| 搜索關(guān)鍵詞: | 一種 試劑 及其 硫化氫 檢測 中的 應(yīng)用 | ||
1.一種試劑,它是5-曡氮熒光素醌,其特征在于結(jié)構(gòu)式為:
2.如權(quán)利要求1所述的一種試劑的合成方法,其特征在于步驟為:將5-氨基熒光素溶解在體積比2:1的醋酸和H2O的混合溶液中,冷卻到0℃,然后加入NaNO2攪拌15分鐘,再加入NaN3,在0℃反應(yīng)1小時,升溫到室溫再反應(yīng)1小時,懸浮液真空抽濾,固體用鹽酸和水洗滌,真空干燥后,得到黃色的5-曡氮熒光素醌固體;5-氨基熒光素、NaNO2和NaN3的摩爾比1:1.5:1.5。
3.一種檢測硫化氫的方法:其特征在于,步驟為:
(1)、配制pH=7.4、濃度為10mM的HEPES緩沖溶液,配制2mM的5-曡氮熒光素醌的乙腈溶液;
(2)、按體積比1000:1000:1,將HEPES緩沖溶液、乙腈溶液和5-曡氮熒光素醌的乙腈溶液加到干凈的熒光比色皿中,在熒光分光光度儀上檢測,隨著待測樣的加入,531nm的熒光強(qiáng)度逐漸增強(qiáng);
(3)、用蒸餾水配制2mM的硫化氫溶液;把1mL的HEPES緩沖溶液、1mL的乙腈溶液1μL的5-曡氮熒光素醌乙腈溶液加到另一個熒光比色皿中,分別在加入硫化氫溶液的體積為0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8、2.0μL時,在熒光分光光度儀上測定531nm對應(yīng)的熒光強(qiáng)度F為95、175、273、382、467、539、643、717、802、883,以硫化氫濃度為橫坐標(biāo),以相對熒光強(qiáng)度F-F0為縱坐標(biāo)繪制圖,F(xiàn)0﹦17,得到硫化氫濃度的工作曲線;線性回歸方程為:F-F0=-3.14+440c,c的單位為μM;
(4)、將HEPES緩沖溶液1000uL、乙腈溶液1000μL和5-曡氮熒光素醌乙腈溶液1uL加到干凈的熒光比色皿中,用微量進(jìn)樣器吸取VμL待測樣品溶液,加入到此干凈的熒光比色皿中,在熒光分光光度儀上檢測,將測得的熒光強(qiáng)度代入(3)的線性回歸方程,得到濃度c,待測樣品C待測樣=(2000+V待測樣)μL×c×10-6/VμL,即可求得硫化氫的濃度。
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