[發明專利]一種試劑及其在硫化氫檢測中的應用

有效

• 申請號: 201410194129.0
• 申請日: 2014-05-08
• 公開（公告）號: CN103937491A
• 公開（公告）日: 2014-07-23
• 發明（設計）人: 霍方俊;陰彩霞
• 申請（專利權）人: 山西大學
• 主分類號: C09K11/06
• 分類號: C09K11/06;C07D493/10;G01N21/64
• 代理公司: 山西五維專利事務所(有限公司) 14105
• 代理人: 張福增

1.一種試劑，它是5-曡氮熒光素醌，其特征在于結構式為：

2.如權利要求1所述的一種試劑的合成方法，其特征在于步驟為：將5-氨基熒光素溶解在體積比2:1的醋酸和H₂O的混合溶液中，冷卻到0℃，然后加入NaNO₂攪拌15分鐘，再加入NaN₃，在0℃反應1小時，升溫到室溫再反應1小時，懸浮液真空抽濾，固體用鹽酸和水洗滌，真空干燥后，得到黃色的5-曡氮熒光素醌固體；5-氨基熒光素、NaNO₂和NaN₃的摩爾比1:1.5:1.5。

3.一種檢測硫化氫的方法：其特征在于，步驟為：

(1)、配制pH＝7.4、濃度為10mM的HEPES緩沖溶液，配制2mM的5-曡氮熒光素醌的乙腈溶液；

(2)、按體積比1000:1000:1，將HEPES緩沖溶液、乙腈溶液和5-曡氮熒光素醌的乙腈溶液加到干凈的熒光比色皿中，在熒光分光光度儀上檢測，隨著待測樣的加入,531nm的熒光強度逐漸增強；

(3)、用蒸餾水配制2mM的硫化氫溶液；把1mL的HEPES緩沖溶液、1mL的乙腈溶液1μL的5-曡氮熒光素醌乙腈溶液加到另一個熒光比色皿中，分別在加入硫化氫溶液的體積為0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8、2.0μL時，在熒光分光光度儀上測定531nm對應的熒光強度F為95、175、273、382、467、539、643、717、802、883，以硫化氫濃度為橫坐標，以相對熒光強度F－F₀為縱坐標繪制圖，F₀﹦17，得到硫化氫濃度的工作曲線；線性回歸方程為：F－F₀＝-3.14+440c，c的單位為μM；

(4)、將HEPES緩沖溶液1000uL、乙腈溶液1000μL和5-曡氮熒光素醌乙腈溶液1uL加到干凈的熒光比色皿中，用微量進樣器吸取VμL待測樣品溶液，加入到此干凈的熒光比色皿中，在熒光分光光度儀上檢測，將測得的熒光強度代入(3)的線性回歸方程，得到濃度c，待測樣品C_待測樣＝(2000+V_待測樣)μL×c×10^-6/VμL,即可求得硫化氫的濃度。