[發(fā)明專利]基于核酸等溫擴增基因跳躍復制擴增法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410191895.1
• 申請日: 2014-05-08
• 公開（公告）號: CN103966200A
• 公開（公告）日: 2014-08-06
• 發(fā)明（設計）人: 曲海濤;張文超
• 申請（專利權(quán)）人: 哈爾濱德歌生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/32
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1.一種基于核酸等溫擴增基因跳躍復制擴增法，所設計的引物在Bst DNA聚合酶作用下，可以在等溫條件下高特異性、高效和快速地完成DNA擴增，其特征在于：基因可以通過跳躍復制完成擴增，從而提高了基因擴增的反應效率，引物與目標DNA結(jié)合后并不完全按照DNA序列進行互補延伸擴增，而是在擴增過程中發(fā)生了跳躍擴增，導致擴增產(chǎn)物片段與預期產(chǎn)物片段不一致，即與其他核酸擴增方法擴增產(chǎn)物不一致。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：基因跳躍擴增產(chǎn)物與其它擴增方法的產(chǎn)物不一致，本方法是全新的擴增方法，因此只要生成此種擴增產(chǎn)物的引物結(jié)構(gòu)就都在此方法的保護范圍，其引物設計特征在于：本擴增法所采用引物結(jié)構(gòu)如說明書中圖2、圖3、圖4、圖5、圖6所示，可以采用多種核酸擴增引物設計核心結(jié)構(gòu)應用于核酸等溫擴增，也包括只加入一個引物時，基于此理論實現(xiàn)的單引物擴增，其中F₀物是變值，F(xiàn)₀可以是從0值（即沒有F₀）到一定長度的引物片段，每個F₀取值都是獨立的，他們可取同值也可取不同值。

3.根據(jù)權(quán)利要求1及權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于：引物設計結(jié)構(gòu)是本方法擴增反應的充分條件，因此也包括無論在這些引物設計結(jié)構(gòu)基礎上加入幾個引物（包括加入任何引物結(jié)構(gòu)）。

4.根據(jù)權(quán)利要求1及權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于：結(jié)構(gòu)中F₀引物是變值，但最好不能引起引物二聚體的可以從0值（即沒有F₀）到一定長度的引物片段，F(xiàn)₀當然也可以設計成目標反應區(qū)域DNA分子片段上的部分鏈。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4所述的方法，其特征在于：我們引物設計結(jié)構(gòu)不僅可以應用于（DNA、RNA）定性、定量檢測，也包括未來應用于基因制藥領域，具體說是能過此此技術合成基因應用于診斷和治療領域，包括在適合的酶的作用下在生物體內(nèi)通過此技術合成核酸。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-5所述的方法，其特征在于：本專利擴增反應目前是基于Bst DNA 聚合酶進行等溫擴增，無論用何種酶，或者調(diào)整反應體系，也包括在反應體系中增加甜菜堿、牛血清白蛋白、Triton等物質(zhì)，只要通過以上這些引物設計結(jié)構(gòu)完成基因跳躍復制都在本專利保護范圍，無論何種溫度（等溫或變溫）通過以上結(jié)構(gòu)合成核酸都在本專利保護范圍（所有已申報專利的除外）。

7.無論我們個別結(jié)構(gòu)反應機理表述是否正確，但只要它能持續(xù)反應，具有特異性的擴增，我們的引物設計結(jié)構(gòu)就是可行的。

8.本專利中核酸擴增反應中的引物設計結(jié)構(gòu)，也可以表述成核酸合成的結(jié)構(gòu)原理。