[發明專利]一種PGI和PGII聯合檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201410191707.5
• 申請日: 2014-05-07
• 公開（公告）號: CN103995127A
• 公開（公告）日: 2014-08-20
• 發明（設計）人: 楊雷;劉揚;劉琴;代麗
• 申請（專利權）人: 無錫宜偌維盛生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/535
• 代理公司: 北京愛普納杰專利代理事務所(特殊普通合伙) 11419
• 代理人: 何自剛;王玉松

技術領域

本發明涉及一種PGI和PGII聯合檢測試劑盒，尤其是通過酶聯免疫一步法聯合檢測PGI和PGII的試劑盒，屬于體外診斷試劑領域。

背景技術

胃癌是全球高危死亡率的第二大疾病，嚴重威脅著人類健康。胃癌是最常見的惡性腫瘤之一，死亡率局各種惡性腫瘤前列，全球每年934,000新發胃癌病例，42％(近40萬)的新發病例數在我國，胃癌在我國的患病率和死亡率均是世界水平的2倍多。其早期診斷、早期治療是提高患者生存質量、降低死亡率的唯一途徑，改善胃癌患者預后的關鍵是作好二級預防，血清胃蛋白酶原(PG)檢測可以作為胃癌篩查“二步法”中的初篩方法。聯合測定ＰＧＩ和ＰＧⅡ的水平及其比值可起到胃黏膜“血清學活檢”的作用，有利于胃癌的預防干預、早期診斷以及術后復發預測。近年來，血清PG含量的變化與胃癌及其他胃部疾病的關系及其作為初篩手段在胃癌篩查中的應用已引起越來越多研究者的關注。

PG是一種門冬氨酸蛋白酶前體，是分子質量為42KDa的單鏈多肽。人類PG依其電泳遷移率可以分為7個組分，1-5組分的免疫原性相同，成為PGI，主要由胃腺的主細胞和黏液頸細胞分泌；組分6-7被稱為PGII，除由胃體和胃底黏膜的泌酸腺的主細胞分泌外，泌酸腺的黏液頸細胞、賁門腺和胃竇的幽門腺的黏液細胞以及十二指腸上段的Brunner腺也能產生PGII。由于胃幾乎是PG的唯一來源，并且在分泌階段的分泌量會發生變化，因此，血清PGI和PGII不僅反映了胃黏膜腺體和細胞的數量，也間接反映了胃黏膜不同部位的分泌功能。

通常情況下約有1％的PG通過胃黏膜進入血液循環，進入血液循環的PG在血液中非常穩定。血清PG水平是反映胃黏膜形態和功能的良好指標。大部分酶原進入胃腔，經酸解成具有活性的胃蛋白酶發揮其消化蛋白質的作用。但也有少量透過胃黏膜毛細血管進入血液，可從血清中檢測。當胃粘膜發生病變時，血清中PG的含量也隨之發生改變。血清PG含量的變化與胃癌及其他胃部疾病的關系及其作為初篩手段在胃癌篩查中的應用已引起越來越多研究者的關注。研究發現，在常規體檢中大約有15％左右的人的血清PG水平異常，而進一步進行胃鏡檢查，其中90％以上的患者有不同程度的淺表性胃炎、糜爛性胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、萎縮性胃炎、胃癌等胃部疾病。近年來，血清PG含量的變化與胃癌及其他胃部疾病的關系及其作為初篩手段在胃癌篩查中的應用已引起越來越多研究者的關注。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種PGI和PGII聯合檢測試劑盒。所述試劑盒利用抗原抗體特異性反應來檢測血清中PGI和PGII的含量，主要由以下部分組成：包被有PGI抗體的微孔板、包被有PGII抗體的微孔板、酶標抗體、校準品、底物液、終止液、濃縮洗滌液。

所述試劑盒還包括質控品、封板膜和說明書。

所述PGI抗體和PGII抗體是利用PGI和PGII抗原蛋白免疫小鼠制備單克隆抗體得到，或直接購買商業化PGI抗體和PGII抗體產品。所述PGI和PGII抗原蛋白是通過基因工程克隆表達得到的蛋白。

所述分別包被有PGI抗體、PGII抗體的微孔板的制備：

(1)包被：用包被機或移液器將包被液按100μl/孔加入微孔板，封板膜封閉微孔板，放置于4℃冰箱過夜，用洗板機、稀釋至0.025M的濃縮洗滌液洗板5次；所述包被液包括PGI包被液和PGII包被液，PGI包被液是將PGI抗體用包被緩沖液配制成0.5μg/ml濃度，攪拌混勻；PGII包被液是將PGII抗體用包被緩沖液配制成0.5μg/ml濃度，攪拌混勻；所述微孔板是96孔板；

(2)封閉：用包被機或移液器將封閉液按300μl/孔加入微孔板；封板膜封閉微孔板，放置于37℃封閉1小時；用洗板機、稀釋至0.025M的濃縮洗滌液洗板5次；

(3)真空包裝：將經上述處理后的微孔板放置于37℃烘箱干燥0.5小時；立即用真空封裝機進行真空包裝。

所述酶標抗體為PGI和PGII抗體標記的辣根過氧化物酶，使用酶標抗體效價為100IU/ml，酶標抗體稀釋液是含有0.5％(m/v)酪蛋白、1％(m/v)蔗糖、0.01％(m/v)疊氮鈉的0.1M的磷酸鹽緩沖液，pH7.4。

所述校準品為用校準品稀釋液配制的不同濃度PGI和PGII抗原蛋白溶液，校準品濃度范圍：PGI為0-180μg/L，PGII為0-50μg/L；所述校準品稀釋液是含有1μg/ml牛乳糖、3％(m/v)甘露醇、1％(m/v)蔗糖、1％麥芽糖(m/v)、1％山梨醇(m/v)、0.01％(m/v)疊氮鈉的0.01M的磷酸鹽緩沖液，pH7.4。