[發明專利]一種PGI和PGII聯合檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201410191707.5
• 申請日: 2014-05-07
• 公開（公告）號: CN103995127A
• 公開（公告）日: 2014-08-20
• 發明（設計）人: 楊雷;劉揚;劉琴;代麗
• 申請（專利權）人: 無錫宜偌維盛生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/535
• 代理公司: 北京愛普納杰專利代理事務所(特殊普通合伙) 11419
• 代理人: 何自剛;王玉松

1.一種PGI和PGII聯合檢測試劑盒，其特征在于，主要由以下部分組成：包被有PGI抗體的微孔板、包被有PGII抗體的微孔板、酶標抗體、校準品、底物液、終止液、濃縮洗滌液；所述酶標抗體為PGI和PGII抗體標記的辣根過氧化物酶。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括質控品、封板膜和說明書。

3.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述PGI抗體和PGII抗體是利用PGI和PGII抗原蛋白免疫小鼠制備單克隆抗體得到，或直接購買商業化PGI抗體和PGII抗體產品；所述PGI和PGII抗原蛋白是通過基因工程克隆表達得到的蛋白。

4.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述分別包被有PGI抗體、PGII抗體的微孔板的制備步驟如下：

(1)包被：將包被液按100μl/孔加入微孔板，封板膜封閉微孔板，放置于4℃冰箱過夜，用稀釋至0.025M的濃縮洗滌液洗板5次；所述包被液包括PGI包被液和PGII包被液，PGI包被液是將PGI抗體用包被緩沖液配制成0.5μg/ml濃度，攪拌混勻；PGII包被液是將PGII抗體用包被緩沖液配制成0.5μg/ml濃度，攪拌混勻；

(2)封閉：將封閉液按300μl/孔加入微孔板；封板膜封閉微孔板，放置于37℃封閉1小時；用稀釋至0.025M的濃縮洗滌液洗板5次；

(3)真空包裝：將經上述處理后的微孔板放置于37℃烘箱干燥0.5小時；立即用真空封裝機進行真空包裝。

5.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述酶標抗體效價為100IU/ml，酶標抗體稀釋液是含有0.5％(m/v)酪蛋白、1％(m/v)蔗糖、0.01％(m/v)疊氮鈉的0.1M的磷酸鹽緩沖液，pH7.4。

6.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述校準品為用校準品稀釋液配制的不同濃度PGI和PGII抗原蛋白溶液，校準品濃度范圍：PGI為0-180μg/L，PGII為0-50μg/L；所述校準品稀釋液是含有1μg/ml牛乳糖、3％(m/v)甘露醇、1％(m/v)蔗糖、1％麥芽糖(m/v)、1％山梨醇(m/v)、0.01％(m/v)疊氮鈉的0.01M的磷酸鹽緩沖液，pH7.4。

7.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述底物液的組成為：0.2mg/ml過氧化脲、0.1M檸檬酸緩沖液、0.5mg/ml3,3',5,5'-四甲基聯苯胺(TMB)、0.01％(v/v)二甲基亞砜，pH5.5。

8.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述終止液為2M的硫酸。

9.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述濃縮洗滌液的組成為：0.5M磷酸鹽緩沖液，2.0％(m/v)十二烷基硫酸鈉，pH7.4。

10.一種應用權利要求1所述試劑盒檢測血清PGI和PGII含量的方法，其特征在于，是將檢測樣本和酶標抗體在微孔板中進行酶聯免疫反應，然后用洗滌液洗板，再向微孔板中加入底物液反應，最后加入終止液測定450nm吸光值，與標準曲線比較、計算得到血清PGI和PGII含量。