[發(fā)明專利]以酵母粉代替玉米漿發(fā)酵提高鈍齒棒桿菌的L-精氨酸生產(chǎn)能力的方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201410190809.5 | 申請日： | 2014-05-08 |
| 公開（公告）號： | CN104450816A | 公開（公告）日： | 2015-03-25 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 許正宏;趙芹芹;竇文芳;羅玉常;張曉梅;耿燕;史勁松 | 申請（專利權(quán)）人： | 江南大學(xué) |
| 主分類號： | C12P13/10 | 分類號： | C12P13/10;C12R1/15 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 214122 江蘇*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 酵母粉 代替 玉米 發(fā)酵 提高 鈍齒棒 桿菌 精氨酸 生產(chǎn)能力 方法 | ||
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明以酵母粉代替鈍齒棒桿菌(Corynebacterium?crenatum)發(fā)酵培養(yǎng)基中玉米漿組分進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)L-精氨酸的應(yīng)用研究，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)
L-精氨酸(L-Arginine)為半必須氨基酸，是尿素循環(huán)的重要中間代謝產(chǎn)物，因具有多種重要的生理功能而廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品及化工領(lǐng)域。微生物發(fā)酵法有節(jié)能環(huán)保、易提取分離等優(yōu)點，具有重要的工業(yè)化應(yīng)用價值。鈍齒棒桿菌(Corynebacterium?crenatum)?SYPA5-5是本研究室經(jīng)過多級誘變篩選獲得的一株L-精氨酸高產(chǎn)菌株，以葡萄糖為主要碳源，發(fā)酵大量積累L-精氨酸。
C.?crenatum發(fā)酵生產(chǎn)L-精氨酸的培養(yǎng)基中需添加一定量的玉米漿，因其含有菌株生長所必須的多種營養(yǎng)元素而有利于菌株生長及L-精氨酸的積累。但由于不同批次玉米漿成分差異懸殊，即使同批次玉米漿由于攪拌等不均勻而造成組分分布差異較大，由此而導(dǎo)致L-精氨酸產(chǎn)量不穩(wěn)定，批次差異大等問題。選擇一種成分相對穩(wěn)定，且有利于L-精氨酸積累的物質(zhì)代替玉米漿進(jìn)行發(fā)酵，對于L-精氨酸生產(chǎn)菌株的發(fā)酵特性研究及工業(yè)化生產(chǎn)具有重要意義。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種以酵母粉代替鈍齒棒桿菌(Corynebacterium?crenatum)發(fā)酵培養(yǎng)基中玉米漿組分進(jìn)行發(fā)酵來提高L-精氨酸產(chǎn)量的方法。首先，考察不同濃度酵母粉及玉米漿對菌株生長及發(fā)酵積累L-精氨酸的影響，然后，比較最適酵母粉及玉米漿濃度下菌株發(fā)酵過程。本發(fā)明提供的方法屬于基金項目：國家863資助項目（No.?2012AA022102）的研究內(nèi)容。具體發(fā)明方案如下：
1.?不同濃度酵母粉及玉米漿對菌株生長及發(fā)酵積累L-精氨酸的影響
采用搖瓶分批發(fā)酵的方式對C.?crenatum進(jìn)行發(fā)酵，分別在發(fā)酵培養(yǎng)基中加入15、20、25、30、35、40?(g/L)玉米漿及2、5、10、15、20、25?(g/L)酵母粉，發(fā)酵96?h，分別測定菌體生物量和L-精氨酸的產(chǎn)量。具體的方案如下：
(1)?搖瓶種子培養(yǎng)：保存于斜面的C.?crenatum，劃線到肉湯平板上，置于30?℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24?h，挑取菌體，接種至搖瓶種子培養(yǎng)基中，置于30?℃?120?rpm往復(fù)式搖床上培養(yǎng)12-16?h，至OD562nm約為15。肉湯培養(yǎng)基組分(g/L)：葡萄糖?20；蛋白胨?10；牛肉膏?10；酵母粉5；NaCl?5；瓊脂粉20；pH?7.0～7.2；121?℃高壓蒸汽滅菌20?min。種子培養(yǎng)基組分(g/L)：葡萄糖?30；玉米漿?20；(NH4)2SO4?20；KH2PO4?1；MgSO4·7H2O?0.5；尿素?1.5；pH?7.0～7.2；121?℃高壓蒸汽滅菌20?min。
(2)?搖瓶分批發(fā)酵：將培養(yǎng)好的種子按5%的接種量接種至搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基中，置于30?℃?120?rpm往復(fù)式搖床上培養(yǎng)96?h，發(fā)酵至24?h補加50?g/L葡萄糖。搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基組分(g/L)：葡萄糖(分消)?100；(NH4)2SO4?50；KH2PO4?1.5；MgSO4.7H2O?0.5；FeSO4·7H2O?0.02；MnSO4·H2O?0.02；生物素?8?×10-5；L-組氨酸5×10-4；CaCO3?30；分別加入玉米漿或酵母粉以達(dá)到上述濃度；pH?7.0～7.2；115?℃高壓蒸汽滅菌7?min。
(3)?發(fā)酵參數(shù)檢測：
A.?生物量：用0.25?mol/L?HCl對發(fā)酵液進(jìn)行適當(dāng)倍數(shù)稀釋后，紫外分光光度計測定OD562nm，OD值與菌體干重的關(guān)系為1?OD562nm?=?0.375?g(DCW)/L。
B.?L-精氨酸含量：坂口試劑法測定。
2.?比較最適酵母粉及玉米漿濃度下菌株發(fā)酵過程
該專利技術(shù)資料僅供研究查看技術(shù)是否侵權(quán)等信息，商用須獲得專利權(quán)人授權(quán)。該專利全部權(quán)利屬于江南大學(xué)，未經(jīng)江南大學(xué)許可，擅自商用是侵權(quán)行為。如果您想購買此專利、獲得商業(yè)授權(quán)和技術(shù)合作，請聯(lián)系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201410190809.5/2.html，轉(zhuǎn)載請聲明來源鉆瓜專利網(wǎng)。
