[發明專利]基于鄰位觸擊效應的均相化學發光免疫分析方法

有效

• 申請號: 201410190726.6
• 申請日: 2014-05-07
• 公開（公告）號: CN104165999B
• 公開（公告）日: 2018-08-07
• 發明（設計）人: 鞠熀先;嚴楓;宗晨;吳潔
• 申請（專利權）人: 南京大學;江蘇省腫瘤醫院
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N21/76
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種基于鄰位觸擊效應的均相化學發光免疫分析方法，其特征在于該方法的檢測溶液包含DNA1-抗體1偶聯物、DNA2-抗體2偶聯物、輔助DNA3、輔助DNA4、分子信標DNA5和限制性內切酶；在目標蛋白質存在時，DNA1-抗體1偶聯物與DNA2-抗體2偶聯物通過夾心免疫反應形成免疫復合物，同時DNA1與輔助DNA3、DNA2與輔助DNA4互補雜交，使輔助DNA3與輔助DNA4相互靠近，產生鄰位觸擊效應，形成鄰位觸擊復合物，該復合物具有與分子信標DNA5互補的序列，因而與分子信標DNA5雜交，打開其發卡結構；鄰位觸擊復合物與DNA5形成的雙鏈結構能被限制性內切酶識別，將DNA5剪切成超短鏈DNA，并從復合物上脫落，產生游離的化學發光染料Cy5，而該復合物可以與另一DNA5進行雜交，打開其發卡結構，并通過限制性內切酶進行第二輪剪切，如此循環，可產生大量游離Cy5；在檢測溶液中加入化學發光底物，可獲得靈敏的Cy5化學發光信號，實現對目標蛋白質的高靈敏定量分析。

2.根據權利要求1所述的免疫分析方法，其特征在于所述的輔助DNA3含有51個堿基，從3’端開始的1-20堿基位點與DNA1的5’端開始的21-40堿基位點完全堿基互補；輔助DNA4含有49個堿基，從5’端開始的1-20堿基位點與DNA2的3’端開始的21-40堿基位點完全堿基互補。

3.根據權利要求1所述的免疫分析方法，其特征在于所述的輔助DNA3從3’端開始的33-40堿基位點與輔助DNA4的5’端開始的33-40堿基位點完全堿基互補；分子信標DNA5含有24個堿基，3’端修飾猝滅劑BHQ，5’端修飾Cy5；DNA5從3’端開始的1-4堿基位點與從5’端開始的1-4堿基位點完全互補，形成發卡結構。

4.根據權利要求1所述的免疫分析方法，其特征在于所述的分子信標DNA5從5’端開始的4-12堿基位點與輔助DNA4的3’端開始的1-9堿基位點完全堿基互補；從3’端開始的4-12堿基位點與輔助DNA3的5’端開始的1-9堿基位點完全堿基互補；而且5’端開始的6-12及14-20堿基位點的堿基序列均為可被限制性內切酶識別的CCTCAGC。

5.根據權利要求1所述的免疫分析方法，其特征在于所述的檢測溶液與含有待測目標蛋白質的樣品溶液混合，在37℃下溫育30分鐘后，加入化學發光底物，用化學發光檢測儀進行光信號采集，從標準曲線求出樣品中蛋白質的濃度。