[發(fā)明專利]一種從蛹蟲草中提取蟲草素的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410190548.7
• 申請日: 2014-05-08
• 公開（公告）號: CN104072559A
• 公開（公告）日: 2014-10-01
• 發(fā)明（設計）人: 劉安球;程倩;劉高潔;牛國成;李文龍;曲海明
• 申請（專利權）人: 寧波廣發(fā)文博生物科技有限公司
• 主分類號: C07H19/16
• 分類號: C07H19/16;C07H1/08
• 代理公司: 杭州杭誠專利事務所有限公司 33109
• 代理人: 尉偉敏

1.一種從蛹蟲草中提取蟲草素的方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）將干燥的提取原料粉碎后，加水并在真空條件下至少超聲提取二次，合并提取液；

（2）將步驟（1）中的提取液粗濾后，通過732型陽離子樹脂，得第一流出液；?

（3）對第一流出液進行靜置沉降并收集上清液，將上清液再通過732型陽離子樹脂，得第二流出液；

（4）將第二流出液通過微孔濾膜進行精濾，得精濾液；

（5）對精濾液進行反滲透濃縮，得第一濃縮液；

（6）將第一濃縮液pH調節(jié)為3~4后加入預處理后的732型陽離子樹脂進行上樣吸附，接著分別用1~3倍柱體積，pH為3~4的鹽酸、5~10倍柱體積的純化水進行洗柱，最后用濃度為0.15~0.25?mol/L的氨水進行洗脫，對洗脫液進行HPLC檢測，收集檢測有蟲草素的洗脫液，精濾，得粗提液；

（7）將粗提液pH調節(jié)至10~12后加入預處理后的717型陰離子樹脂進行上樣吸附，接著分別用1~3倍柱體積，pH為10~12的氫氧化鈉溶液進行洗柱，最后用純化水進行洗脫，對洗脫液進行HPLC檢測，收集檢測有蟲草素的洗脫液，得提純液；

（8）對提純液進行反滲透濃縮，得第二濃縮液；

（9）對第二濃縮液進行真空旋轉蒸發(fā)，得蒸發(fā)濃縮液，將蒸發(fā)濃縮液置于1~5℃下結晶，抽濾后將得到的晶體溶于純化水中后至少重結晶二次，得蟲草素晶體，最后將蟲草素晶體經低溫冷凍干燥后即可。

2.?根據(jù)權利要求1所述的一種從蛹蟲草中提取蟲草素的方法，其特征在于，步驟（1）中，所述提取原料為蛹蟲草子實體、蛹蟲草固體培養(yǎng)基或蛹蟲草菌絲體材料。

3.根據(jù)權利要求1所述的一種從蛹蟲草中提取蟲草素的方法，其特征在于，步驟（1）中，提取原料粉碎至10~30目，水的加入量為提取原料質量10~20倍，超聲提取的溫度為20~30℃，超聲提取次數(shù)為2~3次，每次超聲提取時間為60~90min。

4.根據(jù)權利要求1所述的一種從蛹蟲草中提取蟲草素的方法，其特征在于，步驟（4）中，微孔濾膜的孔徑為3~5μm。

5.根據(jù)權利要求1所述的一種從蛹蟲草中提取蟲草素的方法，其特征在于，步驟（5）中，反滲透濃縮的工藝條件為：精濾液溫度為20~30℃，進膜壓力為0.8~1MPa，體積濃縮比為2.5~3.5:1。

6.根據(jù)權利要求1所述的一種從蛹蟲草中提取蟲草素的方法，其特征在于，步驟（6）中，732型陽離子樹脂的預處理步驟為：用純化水浸泡10~12h后，除去懸浮物，用2~3倍樹脂量的1mol/L?NaOH溶液浸泡2~3h，用純化水洗至中性后，再用2~3倍樹脂量的1mol/L?HCl溶液浸泡2~3h，用純化水洗至中性后，于50~60℃下恒溫烘干。

7.根據(jù)權利要求1所述的一種從蛹蟲草中提取蟲草素的方法，其特征在于，步驟（7）中，717型陰離子樹脂的預處理步驟為：用純化水浸泡10~12h后，除去懸浮物，用2~3倍樹脂量的1mol/L?NaOH溶液浸泡2~3h，用純化水洗至中性后，再用2~3倍樹脂量的1mol/L?HCl溶液浸泡2~3h，用純化水洗至中性后，于50~60℃下恒溫烘干。

8.根據(jù)權利要求1所述的一種從蛹蟲草中提取蟲草素的方法，其特征在于，步驟（8）中，反滲透濃縮的工藝條件為：提純液溫度為20~30℃，進膜壓力為0.5~1MPa，體積濃縮比為2~3:1。

9.根據(jù)權利要求1所述的一種從蛹蟲草中提取蟲草素的方法，其特征在于，步驟（9）中，真空旋轉蒸發(fā)溫度為40~50℃，體積濃縮比為120~200：1。