[發明專利]一種HyM土壤修復活性菌群的制備方法

有效

• 申請號: 201410190226.2
• 申請日: 2014-05-07
• 公開（公告）號: CN104250624B
• 公開（公告）日: 2017-10-03
• 發明（設計）人: 武興戰
• 申請（專利權）人: 楊凌國泰農林科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;B09C1/10;C12R1/07;C12R1/25
• 代理公司: 西安新思維專利商標事務所有限公司61114
• 代理人: 韓翎

技術領域

本發明具體涉及一種HyM土壤修復活性菌群的制備方法。

背景技術

背景技術中，中國土壤污染已對土地資源可持續利用與農產品生態安全構成威脅。全國受有機污染物污染的農田已達3600萬公頃，污染物類型包括石油類、多環芳烴、農藥、有機氯等；因油田開采造成的嚴重石油污染土地面積達1萬公頃，石油煉化業也使大面積土地受到污染；在沈撫石油污水灌區，表層和底層土壤多環芳烴含量均超過600mg/kg，造成農作物和地下水的嚴重污染。全國受重金屬污染土地達2000萬公頃，其中嚴重污染土地超過70萬公頃，其中13萬公頃土地因鎘含量超標而被迫棄耕。針對這種狀況，國內已經有很多解決方案，但是都存在著許多弊端，因此我們需要創新一種新型的土壤修復活性菌群制備方法。在核心技術上突出表現為可以人為調控活性菌群制備的溫度和馴化適性能力，從而最大限度的保證其生物活性及抗逆性，使土壤修復活性菌群的制備實現規范性、高活性、安全性，并且操作簡便，大大降低技術成本和提高適性能力。

發明內容

本發明為了解決上述背景技術中的不足之處，提供一種HyM土壤修復活性菌群的制備方法，其能有效的提高土壤修復微生物的生產效率，且最大限度的保證其活性，提升了土壤修復微生物生產的規模化、工業化發展。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案為 ：一種HyM土壤修復活性菌群的制備方法，其特征在于：所述的制備方法為：

(1)將菌株CCTCC No.M204051進行常規斜面培養活化和種子培養，得種子培養液；

(2)然后配制發酵培養基，并經滅菌后接種芽孢桿菌菌種和上述種子培養液，再用高速剪切機進行剪切，得到菌落；

(3) 然后對菌落進行太陽能、外加熱源發酵，得到菌泥；

(4)對菌泥進行收集和干燥。

所述的步驟（2）中的發酵培養基的配方為：酵母提取物5.0-15.0 g/L、蛋白胨10.0-30.0 g/L、氯化鈉8.5-9.0 g/L、葡萄糖20.0-30.0 g/L、亞油酸8-30 g/L、微量元素1-1.5g/L、吐溫80 1～5 g /L、腐殖酸5-10 g /L、低聚糖5-15 g /L、艾蒿2-8 g /L、葛根2-6 g /L、甘草2-10 g /L、紅豆杉葉2-6 g /L、杜鵑2-5 g /L、紫蘇2-4 g /L、腐殖酸3-10 g /L、中蜂蜜3-5 g /L、黃腐酸2-5 g /L、食鹽2-10 g /L、胰蛋白胨2-6 g /L、牛肉膏2-6 g /L、酵素粉2-5 g /L、氨基酸2-12 g /L、意蜂蜜2-6 g /L、紅豆根塊2-6 g /L、其余為水。

所述的步驟(3)的工藝流程中：

a.接菌落微生物發酵液的種子液，接種量為發酵培養基溶液的體積比的5％～15％，種子液的光密度為1～3；

b.發酵過程中，長菌溫度為28℃～30℃，時間為60h～66h；

c.采取慢速加糖方式，發酵液總體積10升，加糖量為100g-350g，且在接種后6h開始，在48h內加完；

d.上述發酵培養基中亞油酸不能直接加入，而經與分散劑混合后才能加入，且控制發酵液中亞油酸的濃度，采用緩慢加入的方式；

e.發酵過程中采用添加氫氧化鈉和鹽酸自動平衡調節pH值，使pH值維持在6.0～6.6之間。

所述的步驟（4）菌泥收集和干燥：發酵結束，發酵液通過高速冷凍離心機用去離子無菌水洗滌三次，洗滌時轉速為7000轉/分，時間為20min，溫度為4℃，離心收集細胞，加保護劑，真空冷凍干燥，即得HyM土壤修復活性菌群。

所述的微量元素為無水醋酸鈉或檸檬酸二銨。

所述的保護劑為甘油、脫脂奶粉、海藻糖或甘露醇。

所述的亞油酸的濃度為0.2 g/L。

所述的分散劑為環糊精。