[發明專利]一種HyM土壤修復活性菌群的制備方法

有效

• 申請號: 201410190226.2
• 申請日: 2014-05-07
• 公開（公告）號: CN104250624B
• 公開（公告）日: 2017-10-03
• 發明（設計）人: 武興戰
• 申請（專利權）人: 楊凌國泰農林科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;B09C1/10;C12R1/07;C12R1/25
• 代理公司: 西安新思維專利商標事務所有限公司61114
• 代理人: 韓翎

1.一種HyM土壤修復活性菌群的制備方法，其特征在于：所述的制備方法為：

(1)將菌株CCTCC No.M204051進行常規斜面培養活化和種子培養，得種子培養液；

(2)然后配制發酵培養基，并經滅菌后接種芽孢桿菌菌種和上述種子培養液，再用高速剪切機進行剪切，得到菌落；

(3) 然后對菌落進行太陽能、外加熱源發酵，得到菌泥；

(4)對菌泥進行收集和干燥；

所述的步驟（2）中的發酵培養基的配方為：酵母提取物5.0-15.0 g/L、蛋白胨10.0-30.0 g/L、氯化鈉8.5-9.0 g/L、葡萄糖20.0-30.0 g/L、亞油酸8-30 g/L、微量元素1-1.5g/L、吐溫80 1～5 g /L、腐殖酸5-10 g /L、低聚糖5-15 g /L、艾蒿2-8 g /L、葛根2-6 g /L、甘草2-10 g /L、紅豆杉葉2-6 g /L、杜鵑2-5 g /L、紫蘇2-4 g /L、腐殖酸3-10 g /L、中蜂蜜3-5 g /L、黃腐酸2-5 g /L、食鹽2-10 g /L、胰蛋白胨2-6 g /L、牛肉膏2-6 g /L、酵素粉2-5 g /L、氨基酸2-12 g /L、意蜂蜜2-6 g /L、紅豆根塊2-6 g /L、其余為水；

所述的步驟(3)的工藝流程中：

a.接菌落微生物發酵液的種子液，接種量為發酵培養基溶液的體積比的5％～15％，種子液的光密度為1～3；

b.發酵過程中，長菌溫度為28℃～30℃，時間為60h～66h；

c.采取慢速加糖方式，發酵液總體積10升，加糖量為100g-350g，且在接種后6h開始，在48h內加完；

d.上述發酵培養基中亞油酸不能直接加入，而經與分散劑混合后才能加入，且控制發酵液中亞油酸的濃度，采用緩慢加入的方式；

e.發酵過程中采用添加氫氧化鈉和鹽酸自動平衡調節pH值，使pH值維持在6.0～6.6之間；

所述的步驟（4）菌泥收集和干燥：發酵結束，發酵液通過高速冷凍離心機用去離子無菌水洗滌三次，洗滌時的轉速為7000轉/分，時間為20min，溫度為4℃，離心收集細胞，加保護劑，真空冷凍干燥，即得HyM土壤修復活性菌群；

所述的微量元素為無水醋酸鈉或檸檬酸二銨；

所述的保護劑為甘油、脫脂奶粉、海藻糖或甘露醇；

所述的亞油酸的濃度為0.2 g/L；

所述的分散劑為環糊精。