[發明專利]以糖蜜為原料提取生物素的方法及檢測方法

有效

• 申請號: 201410188963.9
• 申請日: 2014-05-06
• 公開（公告）號: CN103926130A
• 公開（公告）日: 2014-07-16
• 發明（設計）人: 劉代成
• 申請（專利權）人: 山東師范大學
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N21/25
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 彭成

1.一種以糖蜜為原料提取生物素的方法，其特征在于：步驟如下：

(1)取糖蜜10～15g，加入100～150ml的80～95％乙醇溶液于燒杯中，在40KHz，功率為300～500W，溫度60～70℃條件下超聲處理20～30分鐘；超聲處理后，取出塊狀糖蜜，剩余乙醇溶液降溫至5℃以下，過濾得殘渣；將塊狀糖蜜與殘渣合并，用100～150ml乙醇溶液沖洗過濾，得糖蜜渣塊；

(2)將上述糖蜜渣塊加入到100～150ml的95～100％的乙醇溶液中，在20KHz，300～500W，溫度為55～65℃，間隔5秒超聲3分鐘設置下連續超聲20～30分鐘；超聲處理后，趁熱過濾，得濾液和濾渣，用55～65℃的95～100％乙醇溶液洗濾渣，得洗液和濾渣，合并濾液和洗液得乙醇濾液，濾渣加入N,N-二甲基甲酰胺，攪拌提取，過濾得DMF濾液；

(3)將乙醇濾液和DMF濾液合并，得生物素溶液。

2.一種生物素的薄層層析掃描檢測方法，其特征在于：步驟如下：

(1)取待檢測樣品液，點在硅膠板上，加入展開劑，在展開缸內展開，然后將薄層板拿出放在通風柜中晾干；同時，采用外標一點法點不同濃度的生物素標準品溶液，同時展開；

所述展開劑為二氯甲烷-氯仿-甲醇-冰乙酸混合液，其中，二氯甲烷、氯仿、甲醇、冰乙酸四者的體積比為1～3:1～3:1～2:0.04～0.06，優選3:3:2:0.06；

所述生物素標準品溶液包括濃度分別為0.05μg/μl，0.2μg/μl，0.25μg/μl，0.3μg/μl，0.4μg/μl的一系列標準品溶液；

(2)將2,4-二甲氨基肉桂醛、硫酸和無水乙醇混合，配成染色液，其中2,4-二甲氨基肉桂醛終濃度為0.1～0.2％，硫酸終濃度為1～2％；展完后晾干的展板，用染色液噴霧染色，得到與背景對比明顯的標準品的斑點和樣品的斑點；

(3)利用薄層掃描儀以530nm吸收波長進行薄層層析掃描，照射燈為鎢燈，檢測計算得到生物素標準品溶液質量和峰面積積分值的關系的回歸方程，然后根據樣品液的峰面積積分值計算出樣品液中生物素的質量濃度。

3.根據權利要求2所述的生物素的薄層層析掃描檢測方法，其特征在于：所述硅膠板為涂有硅膠GF₂₅₄高效薄層板。

4.根據權利要求2所述的生物素的薄層層析掃描檢測方法，其特征在于：所述樣品液是通過以下方法制備得到的：

(1)取糖蜜10～15g，加入100～150ml的80～95％乙醇溶液于燒杯中，在40KHz，功率為300～500W，溫度60～70℃條件下超聲處理20～30分鐘；超聲處理后，取出塊狀糖蜜，剩余乙醇溶液降溫至5℃以下，過濾得殘渣；將塊狀糖蜜與殘渣合并，用100～150ml乙醇溶液沖洗過濾，得糖蜜渣塊；

(2)將上述糖蜜渣塊加入到100～150ml的95～100％的乙醇溶液中，在20KHz，300～500W，溫度為55～65℃，間隔5秒超聲3分鐘設置下連續超聲20～30分鐘；超聲處理后，趁熱過濾，得濾液和濾渣，用55～65℃的95～100％乙醇溶液洗濾渣，得洗液和濾渣，合并濾液和洗液得乙醇濾液，濾渣加入N,N-二甲基甲酰胺，攪拌提取，過濾得DMF濾液；

(3)將乙醇濾液和DMF濾液合并，得生物素溶液，即為樣品液。