[發(fā)明專利]全真一氣湯多糖的提取純化的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410188742.1
• 申請日: 2014-05-06
• 公開（公告）號: CN103992415A
• 公開（公告）日: 2014-08-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張志敏;張大鵬;武志娟;趙雅;任培華;梁金羽;朱敬杰;韓福國;劉清飛
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00
• 代理公司: 廣州市越秀區(qū)海心聯(lián)合專利代理事務(wù)所(普通合伙) 44295
• 代理人: 黃為

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種多糖的提取純化方法，尤其涉及一種綠全真一氣湯多糖的提取純化的方法；屬于中藥提取技術(shù)領(lǐng)域。?

背景技術(shù)

全真一氣湯為明清醫(yī)學(xué)大家馮兆張《馮氏錦囊秘錄》中的著名方劑。由熟地黃、白術(shù)、人參、麥冬、五味子、附子、牛膝組成。臨床廣泛用于治療各種老年虛損性疾病，如胃腸疾病，慢性阻塞性肺病、肺癌、等辯證屬氣血陰陽俱虛免疫功能低下者，療效顯著。現(xiàn)代研究表明，多糖具有調(diào)節(jié)免疫，降血脂，抗腫瘤，抗炎，抗衰老等生理功能。?

目前有關(guān)全真一氣湯多糖的提取研究報道很少，本課題組近年對全真一氣湯多糖進行了一定程度的探討，發(fā)現(xiàn)其主要的藥理作用為增強免疫力，對正常小鼠及環(huán)磷酰胺免疫抑制小鼠的非特異性免疫功能有不同程度的增強作用，可提高環(huán)磷酰胺抑制的體液免疫功能，具有腸道粘膜免疫調(diào)節(jié)作用，其主要機理為升高免疫抑制小鼠血清IL-6和TNF-α水平，刺激免疫抑制小鼠機體的細(xì)胞因子分泌，從而達到調(diào)節(jié)免疫功能的作用。?

陳虹在碩士論文中雖然提供了《全真一氣湯總多糖的提取與質(zhì)量控制初步研究》，但是所得的多糖含量不高，提取率也比較低。?

發(fā)明內(nèi)容

針對上述不足，發(fā)明目的在于提供一種提取純化方法簡單，多糖含量高的全真一氣湯多糖的提取純化方法。?

為此，本發(fā)明提供的技術(shù)方案是這樣的：該全真一氣湯多糖的提取純化的方法，依次包括下述步驟：?

1)按全真一氣湯配方比例稱取熟地黃、白術(shù)、人參、麥冬、五味子、附子、牛膝，除熟地外，其余藥材干燥，粉碎；?

2)將熟地切段，與步驟1)粉碎后的藥材混合，用超聲提取法提取藥材1-3次，每次7-9倍水提取25-35min后粗濾，靜置過夜后離心分離，取上清液；?

3)將步驟2)中的上清液濃縮至相對密度為1.15-1.2，用乙醇調(diào)至藥液乙醇含量為75-85％，靜置離心分離，取下層沉淀用乙醇洗滌后于55-65℃真空干燥得粗多糖A；?

4)取步驟3)粗多糖A加水溶解，搖勻，酸調(diào)節(jié)pH至5-6，加入木瓜蛋白酶,在45-55℃，?酶解4-6h，滅活，離心除去沉淀，取下層液得粗多糖酶解液B；?

5)向步驟4)粗多糖酶解液A中加入其體積1/4-1/6的氯仿-正丁醇溶液，震蕩，靜置過夜，收集上層水相溶液，得到多糖溶液B；?

6)取步驟5)多糖溶液B，加水配制成濃度為3-5mg/ml的溶液，調(diào)節(jié)多糖溶液的pH至4.5-5.5，加入大孔樹脂在45-55℃水浴下攪拌1-3h，過濾的粗多糖B；?

7)取步驟6)粗多糖B加水制成濃度為4-6mg/mL的溶液，將溶液裝入透析袋中，封好兩端，放入水中透析，每隔20-28h換一次水，48h后，取出透析袋中的溶液，55-65℃真空干燥即得精多糖。?

進一步的，上述的全真一氣湯多糖的提取純化的方法，步驟1)所述的干燥溫度均為60℃。?

進一步的，上述的全真一氣湯多糖的提取純化的方法，步驟2)所述的超聲條件為在室溫下超2s停2s，功率800w。?

上述的全真一氣湯多糖的提取純化的方法，步驟2)、步驟3)和步驟4)所述的離心條件均為5000rpm×10min。?

進一步的，上述的全真一氣湯多糖的提取純化的方法，步驟3)所述的上清液濃縮是在60℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至藥液相對密度為1.15-1.2。?

進一步的，上述的全真一氣湯多糖的提取純化的方法，步驟4)所述的酸為冰醋酸。?

進一步的，上述的全真一氣湯多糖的提取純化的方法，取步驟2)粗多糖A:水:木瓜蛋白酶的質(zhì)量比是1：50:1.5。?

進一步的，上述的全真一氣湯多糖的提取純化的方法，步驟4)所述的滅活是沸水浴滅活5min。?

進一步的，上述的全真一氣湯多糖的提取純化的方法，步驟6)所述的大孔樹脂是大孔樹脂AB-8。?

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供的技術(shù)方案：操作簡單，多糖含量高，純度高。通過脫蛋白，透析處理后，多糖含量均上升較高。雖然脫蛋白處理本身并沒有提高粗多糖中的多糖含量，但是這個步驟對于整個多糖的精制過程是必不可少的。?

全真一氣湯具有較顯著的臨床療效，對其進行深入的作用機理研究，闡明其科學(xué)內(nèi)涵，具有重要的臨床意義。特別是對于其作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，有必要進行深入研究。全真一氣湯中多種藥材含有多糖類成分，而現(xiàn)代研究亦證明，多糖類成分具有多種生理活性，如提高免疫力、抗病毒等。?

具體實施方式