[發(fā)明專利]一種海洋生物源超氧化物歧化酶提取分離工藝

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410187808.5
• 申請日: 2014-05-06
• 公開（公告）號: CN103966175A
• 公開（公告）日: 2014-08-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 孫繼鵬;易瑞灶;洪碧紅;黃文文;陳偉珠;晉文慧
• 申請（專利權(quán)）人: 國家海洋局第三海洋研究所
• 主分類號: C12N9/02
• 分類號: C12N9/02
• 代理公司: 廈門市新華專利商標代理有限公司 35203
• 代理人: 渠述華

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及水產(chǎn)品的高值化開發(fā)技術(shù)領(lǐng)域，尤指從海洋生物源中提取分離超氧化物歧化酶產(chǎn)業(yè)化提取分離工藝。

背景技術(shù)

超氧自由基被公認為是人體細胞的“殺手”，參與了人類很多嚴重疾病的發(fā)生和發(fā)展過程，比如人體內(nèi)O2-·的存在可直接導(dǎo)致癌細胞生長、輻射損傷、人體衰老、類風濕關(guān)節(jié)炎、肺氣腫、老年性白內(nèi)障、老年性骨關(guān)節(jié)病等疾病，另外像心臟病、糖尿病、紅斑狼瘡、甚至近年來蔓延很快的艾滋病，也都與超氧自由基有密切關(guān)系，是引起衰老、腫瘤等嚴重疾病的罪魁。而超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase, SOD)則是生物體內(nèi)預(yù)防氧毒性的關(guān)鍵性防線，是天然的超氧自由基的“克星”，其功能是清除O2-·，也是生物體內(nèi)唯一清除O2-·的抗氧化酶類。SOD具有抗炎、抗病毒、抗輻射、抗衰老等作用，在病毒性疾病、自身免疫性疾病、心血管疾病、輻射病、癌和癌的放射治療預(yù)防以及人類長壽等領(lǐng)域的研究中也己有突破性進展。目前在醫(yī)學、化妝品、保健食品添加劑等方面得到了廣泛的應(yīng)用。

目前為止SOD產(chǎn)品來源方面主要還是以豬牛血、肝臟等動物組織為主，已建立了從動物血紅細胞中分離純化SOD 的多種方法。在傳統(tǒng)SOD的提取純化過程中，分別使用了大量的有機溶劑丙酮及無機鹽硫酸銨，這些試劑的加入不僅影響酶的活性，而且對于試劑的浪費及后續(xù)的去除工藝，均提高了其產(chǎn)業(yè)成本。并且動物本身攜帶各種細菌病毒等，這就不可避免地容易發(fā)生一些交叉感染，過敏性反應(yīng)等現(xiàn)象，特別是口蹄疫、瘋牛病以及由動物傳播的惡性傳染病的蔓延，人們對于從豬、牛提取SOD等活性成分的安全性產(chǎn)生了質(zhì)疑，生產(chǎn)動物源血液制品的風險加大，許多國家和地區(qū)抵制以動物血液及內(nèi)臟為原料制取的超氧化物歧化酶，使得超氧化物歧化酶在國際市場上極為緊缺。

選擇豐富合理的SOD來源，簡化純化步驟，降低成本，獲得高比活力的SOD是生產(chǎn)SOD關(guān)鍵問題。伴隨我國水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整，水產(chǎn)加工業(yè)也逐步發(fā)展壯大，但加工魚產(chǎn)品同時會產(chǎn)生大量下腳料，占加工魚30%～50%，如果不進行有效處理，不僅污染環(huán)境，還造成大量資源浪費。魚內(nèi)臟中含有豐富的生物酶類，其中SOD活性較高，若以廉價而豐富的魚內(nèi)臟作為工業(yè)生產(chǎn)SOD的資源，簡化分離純化步驟，制備高附加值、市場前景廣闊的SOD產(chǎn)品，實現(xiàn)廢物利用，變廢為寶，就顯得頗為重要。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于以海洋水產(chǎn)加工副產(chǎn)物魚內(nèi)臟為原料，提供一種高純度海洋生物源超氧化物歧化酶提取分離工藝，通過該工藝可以獲得更為安全高效的海洋生物源超氧自由基清除劑產(chǎn)品。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的解決方案是：

一種海洋生物源超氧化物歧化酶提取分離工藝，其步驟包括：

步驟1、經(jīng)勻漿處理的海洋水產(chǎn)加工副產(chǎn)物魚內(nèi)臟，按比例加入緩沖溶液，調(diào)節(jié)提取液pH至6.0～7.4，控制提取溫度，攪拌提取2～6小時；

步驟2、提取液經(jīng)加熱處理去除雜蛋白，直接進入下一步工序；

步驟3、提取液冷卻后經(jīng)離心去除沉淀物，上清液通過多級超濾、微濾、納濾多元膜集成純化系統(tǒng)脫除大分子、分離提純及濃縮，獲得SOD粗品；

步驟4、SOD粗品經(jīng)葡聚糖凝膠G-100與DEAE-FF層析聯(lián)合分離純化，后經(jīng)干燥處理，獲得高純度海洋生物源SOD產(chǎn)品。

所述步驟1中，經(jīng)勻漿海洋水產(chǎn)加工副產(chǎn)物魚內(nèi)臟與緩沖溶液的質(zhì)量體積比，即千克：升，為1:2～1:10。

所述步驟1中，采用的緩沖溶液為0.05～0.3mol/L的Tris-HCL或磷酸緩沖溶液。

所述步驟1中，采用的緩沖溶液采用鹽酸和氫氧化鈉控制提取過程中提取液pH至6.0～7.4。

所述步驟1中，提取溫度控制在60℃以下。

所述步驟1中，在緩沖溶液中加入銅、鋅兩種鹽，銅離子濃度控制在0.2～20.0mmol/L，鋅離子濃度控制在1～20.0mmol/L。

所述步驟1中所用的銅鋅鹽可為硫酸鹽、鹽酸鹽或醋酸鹽。

所述步驟2中，提取液通過加熱去除部分雜蛋白，加熱溫度為60℃，時間控制在30～120分鐘。