[發(fā)明專利]一種生鮮豬肉與解凍豬肉的鑒別方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410187773.5
• 申請(qǐng)日: 2014-05-06
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103954575A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-07-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 蔡慧農(nóng);孫浩;倪輝;肖安風(fēng);林志才
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 集美大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N21/33
• 分類號(hào): G01N21/33;G01N1/28
• 代理公司: 廈門市精誠(chéng)新創(chuàng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 35218
• 代理人: 方惠春

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及豬肉鑒定方法領(lǐng)域，尤其涉及一種生鮮與冷凍后解凍豬肉的鑒別方法。?

背景技術(shù)

隨著食品安全和衛(wèi)生的問(wèn)題越來(lái)越嚴(yán)重，人們都期望買到貨真價(jià)實(shí)的商品。比如在歐美市場(chǎng)中，新鮮肉比解凍肉大約貴20%，最高時(shí)可貴50%，而且解凍肉口感等不及新鮮肉。然而，有些商販為了個(gè)人利益，用冷凍后的解凍豬肉冒充新鮮豬肉出售，使消費(fèi)者利益受到損害。因此，如何鑒別新鮮肉與解凍肉成為目前市面上亟待解決的問(wèn)題之一，但目前國(guó)際上已有的類似判別方法過(guò)程繁瑣，準(zhǔn)確度低，且依然沒(méi)有一種方法判別新鮮豬肉和解凍豬肉。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種簡(jiǎn)便、快捷、成本低廉、準(zhǔn)確率高、所需樣本量少的鑒定方法鑒定豬肉是否新鮮。?

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種生鮮豬肉與冷凍后解凍豬肉的鑒別方法，其特征在于對(duì)比豬肉樣品經(jīng)冷凍解凍前后吸光值的比值，包括如下步驟。?

取待測(cè)樣品兩份，每份2-4g，將其中一份放入-20℃冷凍12h左右，室溫下解凍20min后分析，另一份直接分析；?

分析方法：將2-4g的豬肉放入10ml?100mM?pH=6磷酸緩沖鹽溶液中浸泡10分鐘后，取23μL的浸泡液至600μL?100mM?pH=6磷酸緩沖鹽溶液中，同時(shí)加入50μL?34.4mM?EDTA反應(yīng)3分鐘后，繼續(xù)加27μL的1.5mM?NADH和10μL?5.9mM雙乙酰輔酶A，混合均勻后馬上在340nm處測(cè)其吸光值，設(shè)置每10s記錄一次數(shù)值，記錄2min，以時(shí)間為橫軸，每10s記錄的數(shù)值為縱軸計(jì)算其變化速度；

判斷方法：對(duì)比經(jīng)冷凍后解凍肉與新鮮肉吸光值變化速度的比值，當(dāng)比值大于1.8時(shí)，確定原樣品為新鮮肉；當(dāng)比值小于1.4時(shí)，確定原樣品為解凍肉；當(dāng)比值介于兩者之間時(shí)，需再次判斷，直到結(jié)果大于1.8或者小于1.4。

待測(cè)樣品需為瘦肉部分。?

發(fā)明原理：?

HADH是一種線粒體酶，該酶能在環(huán)境pH為6左右、室溫條件下催化NADH轉(zhuǎn)變?yōu)镹AD⁺，具體反應(yīng)如下：

因此，HADH酶活高低可通過(guò)NADH（反應(yīng)物）的減少速率或NAD⁺（生成物）的增加速率計(jì)算，反應(yīng)物NADH在340nm處有最大吸光值，故HADH酶活高低可通過(guò)NADH的減少速率判斷，即340nm處吸光值的變化速率（減小速率）。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：?

本發(fā)明是通過(guò)對(duì)比樣品與樣品經(jīng)冷凍解凍后的HADH酶活比值，而其它方法則需要測(cè)量大量的解凍肉和新鮮肉的HADH酶活高低，并需利用統(tǒng)計(jì)學(xué)規(guī)律判斷樣品來(lái)源。因此，此方法節(jié)約了判斷時(shí)間和藥品，且結(jié)果明了、易懂。

本發(fā)明鑒定方法將EDTA（34.4mM）與0.1mol/L的磷酸緩沖鹽直接按照50μL與600μL混合。而不是一般的先加入磷酸緩沖鹽，后加入EDTA，因此，本發(fā)明節(jié)約了時(shí)間。?

本發(fā)明鑒定方法將需判別的肉分為大小接近的兩份，每份約2-4g，無(wú)需特別考慮豬肉的具體重量，無(wú)需考慮豬肉的具體部位。?

本發(fā)明從開(kāi)始鑒定到確定結(jié)果只需小于120min，常規(guī)方法則需要數(shù)小時(shí)甚至數(shù)十小時(shí)。?

本發(fā)明鑒定方法只需27μL?NADH和10μL雙乙酰輔酶A（Acetoacetyl-CoA）。一般方案需加入30μL以上NADH和15μL左右雙乙酰輔酶A，該方法降低了鑒定成本。?

本發(fā)明鑒定方法只需要2組樣品（≤10個(gè)樣品）便可以辨別豬肉的來(lái)源，且準(zhǔn)確度極高。其它HADH酶活測(cè)定需做大量的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)并做統(tǒng)計(jì)學(xué)分析才能分辨肉的來(lái)源。?

這些優(yōu)勢(shì)主要源于1、比值法判斷。判斷方法為測(cè)量樣品和樣品經(jīng)冷凍再解凍前后的HADH酶活比值，大大降低了工作量和工作難度，避免了不同部位造成的差異；2、合理的浸泡時(shí)間和浸泡液體積的合理取值。此方法能準(zhǔn)確判斷豬肉樣本的來(lái)源，且使用儀器非常簡(jiǎn)單。?

此外，豬肉取樣只能取瘦，不能取肥肉和骨頭。因?yàn)椋?、從理論上講，肥肉和骨頭內(nèi)含有較少的線粒體，所以無(wú)法用HADH（一種線粒體酶）酶活高低判別肉的來(lái)源；2、從大量的樣本分析發(fā)現(xiàn)，肥肉和骨頭無(wú)法判斷肉的真實(shí)來(lái)源。?

具體實(shí)施方式

下面詳細(xì)描述本發(fā)明的實(shí)施例，所述實(shí)施例的示例旨在用于解釋本發(fā)明，而不能理解為對(duì)本發(fā)明的限制。實(shí)施例中未注明具體技術(shù)或條件者，按照本領(lǐng)域內(nèi)的文獻(xiàn)所描述的技術(shù)或條件或者按照產(chǎn)品說(shuō)明書進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過(guò)市購(gòu)獲得的常規(guī)產(chǎn)品。?