[發(fā)明專利]同時(shí)測(cè)定牛羊肉中四種雌激素殘留量的方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410187686.X
• 申請(qǐng)日: 2014-05-06
• 公開（公告）號(hào): CN103983708A
• 公開（公告）日: 2014-08-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李維紅;高雅琴;熊琳;杜天慶;牛春娥;梁麗娜;楊曉玲;郭天芬
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02
• 代理公司: 北京中恒高博知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11249
• 代理人: 張秋云

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及肉類品質(zhì)檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及同時(shí)測(cè)定牛羊肉中四種雌激素殘留量的方法。?

背景技術(shù)

當(dāng)前，我國食品安全問題因三鹿奶粉中“三聚氰胺”事件而受到更極大關(guān)注。除食品加工中惡意添加外，食品中污染的化學(xué)物質(zhì)更多的來自于喂養(yǎng)畜禽所使用的動(dòng)物飼料、治病所用獸藥殘留及催熟植物所用的生長調(diào)節(jié)劑等。激素類藥物在牛羊產(chǎn)業(yè)中的應(yīng)用可表現(xiàn)在提高樣的繁殖性能，免疫去勢(shì)，高飼料報(bào)酬、促進(jìn)生長，改善牛羊肉品質(zhì)，促進(jìn)泌乳牛羊的產(chǎn)奶量等。我們所食用的牛羊肉也不可避免的會(huì)有雌激素殘留，而這些激素就會(huì)通過食物鏈在人體內(nèi)積累，可誘發(fā)癌變，對(duì)生殖與神經(jīng)等系統(tǒng)帶來影響，還造成嚴(yán)重的環(huán)境問題。還能增加?jì)D女得子宮癌的可能，使生殖道產(chǎn)生炎癥，使女性提前發(fā)育，使男性生殖器官發(fā)生異常與病變及女性乳腺癌和子宮內(nèi)膜異位發(fā)生率上升，因此，對(duì)牛羊肉的監(jiān)測(cè)也是保證安全的措施之一。但是目前國家標(biāo)準(zhǔn)中只有己烯雌酚的檢測(cè)方法，而其余的沒有明確的測(cè)定方法。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的就是針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)中的缺陷，提供了一種可測(cè)定牛羊肉中四種雌激素殘留量的方法。?

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供的技術(shù)方案為：同時(shí)測(cè)定牛羊肉中四種雌激素殘留量的方法，包括有以下步驟：?

1）配制流動(dòng)相、設(shè)置色譜條件：

按體積比甲醇：磷酸氫二鈉為80:20配制流動(dòng)相，色譜條件設(shè)置為檢測(cè)波長210-400nm，流速為1.0ml/min，進(jìn)樣量為10μl；

2）貯備液的制備：

①準(zhǔn)確稱取己烯雌酚、雌二醇、苯甲酸雌二醇和戊酸雌二醇的標(biāo)準(zhǔn)品各50mg，在50ml容量瓶中用甲醇定容至刻度，制成1.0?mg/ml標(biāo)準(zhǔn)品貯備液，備用；

②取批號(hào)不同的牛羊肉樣品，用甲醇超聲萃取、離心，取兩次離心后的上清液蒸干后加甲醇，制成供試品貯備液，備用；

3）專屬性考察：

在步驟1）所述的色譜條件下，對(duì)牛羊肉樣品中的苯甲酸雌二醇進(jìn)行HPLC分離檢測(cè)；

4）線性關(guān)系考察：

分別精密量取己烯雌酚、雌二醇、苯甲酸雌二醇和戊酸雌二醇的標(biāo)準(zhǔn)品貯備液，在50ml容量瓶中用甲醇定容至刻度，過濾、進(jìn)樣并檢測(cè)，以4種混標(biāo)的峰面積比與其質(zhì)量濃度進(jìn)行線性回歸分析；

5）精密度試驗(yàn)：

取同一批號(hào)的牛羊肉供試品貯備液，加混合標(biāo)準(zhǔn)貯備液后，過濾進(jìn)樣，按外標(biāo)法以峰面積測(cè)定4種雌激素的含量；

6）穩(wěn)定性試驗(yàn)：

取另一批號(hào)的牛羊肉樣品溶液于室溫避光放置0-72h后，分別進(jìn)樣測(cè)定，每份樣品10μl；

7）樣品含量測(cè)定：

將步驟2）中所述的混合標(biāo)準(zhǔn)供試品貯備液，加標(biāo)準(zhǔn)品貯備液后，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算樣品中己烯雌酚、雌二醇、苯甲酸雌二醇和戊酸雌二醇的含量。

本發(fā)明的有益效果為：本發(fā)明提供的能夠同時(shí)測(cè)定牛羊肉中四種雌激素殘留量的方法，具有操作簡(jiǎn)便快速、結(jié)果準(zhǔn)確可靠、測(cè)定時(shí)間方面限制較小的優(yōu)點(diǎn),同樣適用于其他激素類藥物。?

附圖說明

圖1為4種雌激素標(biāo)準(zhǔn)樣品圖。?

圖2為蘭州市羊肉樣品四種雌激素檢出圖譜。?

圖3為臨夏州羊肉樣品四種雌激素檢出圖譜。?

圖4為蘭州市牛肉樣品四種雌激素檢出圖譜。?

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1：

1、材料和方法：

1.1、材料：

1.1.1試劑：

甲醇，色譜純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，上海；

磷酸二氫鈉（NaH₂O₄·2H₂O）：國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，上海；

0.043mol/L磷酸二氫鈉溶液：3.4g磷酸二氫鈉（NaH₂O₄.2H₂O）溶于水并定容在500mL容量瓶中得到；

1.1.2標(biāo)準(zhǔn)品：

雌二醇標(biāo)準(zhǔn)品：SIGMA-ALORICH，product?of?Germany；

己烯雌酚標(biāo)準(zhǔn)品：SIGMA-ALORICH，product?of?USA；

苯甲酸雌二醇標(biāo)準(zhǔn)品：中國藥品生物制品檢定所

戊酸雌二醇標(biāo)準(zhǔn)品：中國藥品生物制品檢定所。

雌二醇、己烯雌酚、苯甲酸雌二醇和戊酸雌二醇標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的制備方法：?