[發(fā)明專利]一種高產(chǎn)糖化酶、α?淀粉酶和酸性蛋白酶的亮白曲霉及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410187376.8
• 申請日: 2014-05-05
• 公開（公告）號: CN104250618B
• 公開（公告）日: 2017-03-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 徐巖;吳群
• 申請（專利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12G3/02;C12R1/66
• 代理公司: 北京愛普納杰專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙)11419
• 代理人: 何自剛,王玉松

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種亮白曲霉及其應(yīng)用，特別是一種利用亮白曲霉在提高釀酒過程中酒精產(chǎn)率工藝中的應(yīng)用。?

背景技術(shù)

細菌、酵母和霉菌是中國白酒釀造過程中的三大類微生物，其中霉菌能夠分泌多種酶類并降解淀粉、蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)，為細菌和酵母的生長和發(fā)酵提供物質(zhì)基礎(chǔ)。霉菌同時也能夠分泌一些酯化酶和代謝產(chǎn)物，對中國白酒的風(fēng)味也有一定的影響。中國白酒傳統(tǒng)釀造過程中是開放式生產(chǎn)，過程中涉及到復(fù)雜的霉菌群落；復(fù)雜的霉菌群落既能產(chǎn)生了豐富的酶系，對白酒釀造有著正面貢獻，但一些環(huán)境中有害的霉菌也可能被涉及，給白酒產(chǎn)品的質(zhì)量帶來了潛在的風(fēng)險。?

純種霉菌的篩選和使用已經(jīng)是行業(yè)的一種趨勢，純種霉菌麩曲能夠代替部分大曲，提高白酒生產(chǎn)的出酒率，控制有害微生物的潛在危險。目前白酒生產(chǎn)中常用的霉菌有河內(nèi)白曲霉(Aspergillus?kawachii)、米曲霉(Aspergillus?oryzae)等，這些篩選的霉菌具有較高的糖化力，提高了出酒率。但是傳統(tǒng)篩選麩曲霉菌只以糖化酶為指標，所得菌株酶系較為單一，生產(chǎn)的麩曲白酒的酒質(zhì)比大曲酒差，通常只能用于生產(chǎn)中低端白酒。?

糖化酶、α-淀粉酶都能夠降解淀粉，他們的含量和比例會控制發(fā)酵進程的速度，控制發(fā)酵溫度過快上升，使得整個微生物群落正常演變，保證白酒發(fā)酵的正常進行。白酒釀造的主要原料高粱的成分除了淀粉之外，蛋白質(zhì)也是一個重要的成分(8％-10％)，是酵母細菌生長的重要物質(zhì)基礎(chǔ)，也是形成風(fēng)味物質(zhì)的重要前體。同時，中國白酒發(fā)酵體系是一個偏酸的環(huán)境，在發(fā)酵結(jié)束的時候pH最低能夠達到3.5，因此酸性蛋白酶也在白酒發(fā)酵過程中起到了重要的作用。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種高產(chǎn)糖化酶、α-淀粉酶和酸性蛋白酶的亮白曲霉及其在釀造白酒中的應(yīng)用，以適應(yīng)白酒發(fā)酵的過程，提高酒精的產(chǎn)率。?

本發(fā)明所得亮白曲霉的ITS?rDNA序列，在GenBank中進行Blast對比確定其種屬，與其同源序列最高的菌株分別為(Aspergillus?candidus)，相似度為98％?和98％。?

所述亮白曲霉在PDA培養(yǎng)基上生長，菌落開始為白色，圓形，向四周擴散，然后從菌落中間開始產(chǎn)生白色孢子，最后整個菌落全部變成白色。菌絲白色，纖細，分生孢子；菌落背面略帶黃色。本菌株適應(yīng)性很強，孢子在PDA培養(yǎng)及平板上30℃萌發(fā)，培養(yǎng)3d，菌落直徑為4.2-6.5cm。上述亮白曲霉(Aspergillus?candidus)于2014年3月7日保藏至中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為：CGMCC?No.8900，保藏地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所。?

本發(fā)明菌株高產(chǎn)糖化酶、α-淀粉酶和酸性蛋白酶，其發(fā)酵工藝為：?

種子(PDA)培養(yǎng)基：馬鈴薯先洗凈去皮,再稱取200g馬鈴薯切成小塊，加水煮爛(煮沸20-30min)用八層紗布過濾，加20g瓊脂，葡萄糖20g，再補足水分至1000毫升，121℃滅菌20min冷卻后貯存?zhèn)溆茫?

發(fā)酵培養(yǎng)基：稱取新鮮麩皮(或者其他粉碎原料)并加水，使水分含量約為50％，121℃滅菌20min；?

種子培養(yǎng)方法：挑取一環(huán)亮白曲霉的孢子，接種于種子培養(yǎng)基斜面，30℃培養(yǎng)3d-7d；?

發(fā)酵培養(yǎng)方法：250ml錐形瓶裝培養(yǎng)基20g，將活化的孢子懸浮液接入滅過菌的發(fā)酵培養(yǎng)基并使最終濃度為5×10⁶個/g麩皮，30℃靜止培養(yǎng)48h-72h。?

測定酶活如下：?

菌株在白酒釀造中的應(yīng)用，將活化的孢子懸浮液接種(一級種子)固體培養(yǎng)基中(1-5％，w/w)，在25-35℃環(huán)境中固態(tài)發(fā)酵32-72h，制成固態(tài)菌制劑，再將固態(tài)菌制劑作為種子接種到曲池中(二級種子)進行擴大培養(yǎng)24-72h，二級種子按照5-20％w/w接種量加入白酒生產(chǎn)中。?

菌株在白酒釀造中的應(yīng)用，將活化的孢子懸浮液接種于滅菌的液態(tài)培養(yǎng)基(1-5％，w/w)，25-35℃培養(yǎng)24h-72h。制成液態(tài)菌制劑，再將液態(tài)菌制劑作?為種子接種到曲池中(二級種子)進行擴大培養(yǎng)24-72h，二級種子按照5-20％w/w接種量加入白酒生產(chǎn)中。?

固態(tài)原料培養(yǎng)基，原料包括高粱、麩皮、小麥、大麥、豌豆、大米、玉米、糯米、青稞或其組合。?

液體培養(yǎng)基為液態(tài)原料提取物，原料包括：高粱、麩皮、小麥、大麥、豌豆、大米、玉米、糯米、青稞或其組合。?