[發明專利]促卵泡生成素（FSH）定量測定試劑盒及其制備方法與檢測方法

在審

• 申請號: 201410187359.4
• 申請日: 2014-05-05
• 公開（公告）號: CN105092862A
• 公開（公告）日: 2015-11-25
• 發明（設計）人: 楊旻;汪丹;夏振偉
• 申請（專利權）人: 江蘇澤成生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/74
• 分類號: G01N33/74;G01N33/533;G01N21/64
• 代理公司: 北京聯瑞聯豐知識產權代理事務所(普通合伙) 11411
• 代理人: 曾少麗

技術領域

本發明屬于醫療器械生物類免疫體外診斷領域，主要涉及一種基于磁微粒分離化學發光法定量檢測血液中促卵泡生成素(FSH)定量測定試劑盒及其制備方法，以及應用該試劑盒定量檢測促卵泡生成素(FSH)的方法。

背景技術

促卵泡生成素(FollicleStimulatingHormone，FSH)是一種由垂體前葉分泌的糖蛋白激素，該激素是垂體分泌的促性腺激素之一。促卵泡生成素(FSH)的主要作用是促進和維持正常的性腺發育和生殖功能。促卵泡生成素(FSH)可以促進女性卵泡生成、成熟，促進顆粒細胞增殖、起卵泡分泌；可以刺激男性睪丸支持細胞發育，并可作用于睪丸曲細精管可促進精子形成。正常人血清中FSH基礎值為5～10IU/L。

女性體內的促卵泡生成素(FSH)分泌具有明顯的周期性，血液中促卵泡生成素(FSH)的濃度及每日由尿液排泄的促卵泡生成素(FSH)的量隨月經周期變化而變化。在絕經或卵巢切除后，以及早熟卵巢的衰退期，血液和尿液中促卵泡生成素(FSH)排出量增加。

促卵泡生成素(FSH)在男性體內能夠調控生精小管的發育以及保持生精作用，男性體內的促卵泡生成素(FSH)分泌無明顯周期性，但在50歲以后略有升高。男性在睪丸衰退和克蘭費爾特氏綜合癥的初期會出現體內促卵泡生成素(FSH)升高。另外，促卵泡生成素(FSH)的濃度在人體饑餓、腎衰竭、甲狀腺機能亢進和肝硬化時也會有所提高。

在國內，促卵泡生成素(FSH)檢測主要以國外進口試劑和免疫組化試劑。由于國外進口試劑和和免疫組化試劑的價格都非常昂貴，給患者帶來很大的經濟負擔，非常不利于在基層普及。國內具有自主知識產權的國產促卵泡生成素(FSH)免疫化學發光檢測試劑盒目前還較少，并且僅停留在96孔微孔板式技術水平上，這種落后的檢測技術的靈敏度較低、線性窄、特異性較差，也不利于高通量的全自動檢測。

因此，有待開發對促卵泡生成素(FSH)檢測靈敏度高，可靠性強，并能夠同時降低檢測成本的檢測技術。

發明內容

本發明要解決的技術問題是克服現有技術的缺陷，提供一種新的可定量檢測促卵泡生成素(FSH)的試劑盒，提高檢測靈敏度及可靠性，并降低成本，延長有效期。

為了解決上述技術問題，本發明提供了如下的技術方案：

一方面，本發明提供了一種促卵泡生成素(FSH)定量測定試劑盒，該試劑盒包括校準品、質控品、抗試劑、磁微粒試劑和發光底物。

該試劑盒中各組分按照如下方法制備：

一、校準品、質控品的配制方法如下：

用校準品緩沖液溶解促卵泡生成素(FSH)，配置校準品和質控品；其中，所述校準品緩沖液是通過在1L新生牛血清中加入0.01g～0.05g的四環素和0.1g～0.5g硫酸新霉素，溶解后經過0.22μm濾膜處理制備；

二、抗試劑的制備方法如下：

(1)、抗試劑緩沖液的制備：

Tris：12.12mg，四環素：0.01g～0.05g，綿羊血清：1g～5g，新生牛血清3g～10g，馬血清1g～5g加入1L純化水中，充分攪拌至完全溶解；

(2)、異硫氰酸熒光素與促卵泡生成素(FSH)偶聯，獲得異硫氰酸熒光素標記的促卵泡生成素(FSH)包被抗體：

首先用抗試劑緩沖液將異硫氰酸熒光素配制成濃度為1.0～5.0mg/mL的異硫氰酸熒光素溶液，然后按照促卵泡生成素(FSH)與異硫氰酸熒光素的質量之比為1:1.1，將二者同時轉移到棕色玻璃瓶中，室溫下攪拌1～2小時，充分反應后使用pH＝8～9的碳酸氫鹽緩沖液，進行平衡，然后凝膠層析分離純化出異硫氰酸熒光素標記的促卵泡生成素(FSH)包被抗體；

(3)、堿性磷酸酶與促卵泡生成素(FSH)的偶聯，獲得堿性磷酸酶標記的促卵泡生成素(FSH)標記抗體：

首先用抗試劑緩沖液將堿性磷酸酶配制成濃度為1.0～5.0mg/mL的堿性磷酸酶溶液；然后按照堿性磷酸酶與促卵泡生成素(FSH)的摩爾比為1:2～1:10的量將二者轉移至棕色瓶中，室溫下攪拌4～5小時，充分反應后使用pH＝8～9的碳酸氫鹽緩沖液平衡，然后使用凝膠層析分離純化出堿性磷酸酶標記的促卵泡生成素(FSH)標記抗體，注意含有連接物的試管的避光防護；