[發明專利]竹葉抗氧化肽的分離與純化方法

在審

• 申請號: 201410187223.3
• 申請日: 2014-05-05
• 公開（公告）號: CN103923166A
• 公開（公告）日: 2014-07-16
• 發明（設計）人: 張國棟;唐曉芳;江燕竹;王金娟
• 申請（專利權）人: 西華大學
• 主分類號: C07K1/36
• 分類號: C07K1/36;C07K1/34;C07K1/30;C07K1/18;C07K1/16;G01N21/33
• 代理公司: 北京方圓嘉禾知識產權代理有限公司 11385
• 代理人: 董芙蓉

技術領域：

本發明涉及竹葉抗氧化肽的分離與純化方法，屬于竹葉營養、功能成分的提取技術領域。

背景技術：

竹為禾本科竹亞科，莖為木質多年生常綠植物，具有生長迅速，再生能力強的特點，是極其重要的植物資源，全世界記載的竹類植物約有60多屬,1200多種，面積約有20000萬hm²，主要分布于熱帶、亞熱帶至暖溫帶地區，而中國則是世界上產竹最多的國家之一。在中國境內擁有的竹類植物約有40多屬500余種，竹林面積約有400萬hm²，約占我國森林面積的3％，占世界竹林面積的25％，而四川作為全國產竹基地之一，竹產量非常豐富。竹子全身都是寶，竹材可以用與水利工程、房屋建筑、工藝美術品、生活用的各類器具、人造板、造紙業等，還可制成竹碳作為除臭劑、凈化劑等；竹筍還是受人們喜愛的食品,竹葉及其嫩莖是動物界活化石大熊貓的專一食料，闊葉竹的葉也常被用來包裹食物，如我國的粽子和日本的壽司等；在我國少數民族地區還有飲用竹筒茶、竹葉茶，吃竹米飯的習慣。竹葉作為竹材料加工過程中的剩余物，大多數作為畜類青飼料或者腐爛后成為有機肥，還沒有充分地利用它的價值,且可再生利用，可見竹葉是一類數量極大的潛在資源。

竹葉，在我國擁有悠久的食用和藥用的歷史，具有清熱解毒的功效，在《神農本草經》、《本草綱目》、《本經逢原》、《藥品化義》以及《中藥大辭典》等醫書專著中均有記載：“涼心緩脾”、“明目利九竅”、“治上焦風邪煩熱”、“清痰止渴”、“生津利尿”、“殺小蟲”等，并且在1998年，竹葉被衛生部批準列入了藥食兩用的天然植物名單。

竹葉提取物(Extract?of?Bamboo?Leaves,Ebl)是指從竹葉中提取的含有黃酮類及其甙類、活性多糖類、特種氨基酸及其肽類等一系列化合物構成的混合物，具有抑菌、抗血栓、抗氧化、調節血脂、抗疲勞、抗衰老、除草、殺蟲等作用，且無毒副作用具有良好的安全性，可以應用于食品、化妝品、醫藥、農業等行業中。馬世玉等研究了竹葉提取液對衰老組織的抗氧作用，結果表明，竹葉提取液能顯著提高大鼠腦組織、心肌組織和血清中的SOD(超氧化歧化酶)、GSH-Px(谷胱甘肽過氧化物酶)，抑制MDA(丙二醛)和脂褐素的含量，起到保護腦和心臟等，對抗D-半乳糖所致衰老退行性變的作用。另外，還有研究表明竹葉提取物具有清除O2·—、·OH和抑制脂質氧化的能力。張偉等測定了淡竹葉的乙醇醋酸、乙醇、水三種提取液對食品致病菌的抑制作用，發現三種提取液對食品致病菌：傷寒沙門氏菌、痢疾志賀氏菌、小腸結腸炎耶爾森氏菌、金黃葡萄球菌、蠟樣芽孢桿菌、魏氏梭菌、肉毒梭菌均有不同程度的抑制作用，并與提取液濃度、作用時間成正效應關系。傅劍云等人研究了竹葉抗氧化物對大鼠的急性、亞慢性毒性，結果表明在實驗研究條件下，竹葉抗氧化物急性毒性根據GB15193-94急性分類，屬實際無毒類；亞慢性毒性為按大鼠90天喂養試驗劑量組各指標測定均未見明顯毒性反應。在國外也有相關文獻的報道：柴田等進行了竹葉提取物藥理學方面的研究，結果表明竹葉提取物對食道、膀胱、腎臟、肝、肺以及子宮癌有顯著的療效；從箬竹葉中提取的Bamfolin粉末，對肝腹水瘤AH39有100％的抑制作用，對鼻咽癌、上腭癌、腹腔癌、胃癌、卵巢癌、食道癌和肉瘤等均有不同程度的療效，而且長期服用對肝臟、血液均無副作用；有動物實驗表明，竹葉提取物能促進血清中SOD的活性，能顯著抑制乳腺腫瘤、乳腺肥大增生，對動物的生長發育無副作用；日本研究者從竹葉中提取出具有高效、無毒副作用天然可食的防霉防腐劑，能夠有效的抑制細菌、霉菌以及酵母，可以應用于蔬菜水果、肉質品以及飼料中。在國內，2004年4月竹葉提取物作為一種抗氧化劑被衛生部批準列入國家標準，被廣泛應用于油脂、肉制品、飲料類、水產品及其制品等方面，目前竹葉提取物及其相關產品已有上市，如竹康寧、金沙源、AOB等，并有小批量出口到其它國家，市場反應良好。

本專利首次揭示了竹葉內含有一種天然抗氧化肽。自由基是指包含有一個未配對電子的原子、原子團、分子或離子。在生物體中，氧化代謝是細胞存活所必須的，但物質氧化的負面效應是其會在體內產生大量的自由基和其它活性氧從而改變機體的氧化還原狀態。其中與機體生命活動有關的自由基則包括活性氧(reactive?oxygen?species,ROS)和活性氮(reactive?nitrogen?species,RNS)兩大類，活性氧是指氧在生物體內通過單電子還原產生化學性質活潑的物質,它們包括超氧陰離子自由基、過氧化氫和羥基自由基等；活性氮則是指是NO及NO/O₂、NO/O₂·—反應生成的系列含氮化合物。