[發(fā)明專利]一種S-腺苷甲硫氨酸分子印跡傳感器的制備方法及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410186337.6
• 申請(qǐng)日: 2014-05-06
• 公開（公告）號(hào): CN103954675A
• 公開（公告）日: 2014-07-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李慧芝;許崇娟;宋桂蘭
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 濟(jì)南大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N27/48
• 分類號(hào): G01N27/48;G01N27/30
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及的是一種分子印跡傳感器的制備方法及快速檢測(cè)應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種S-腺苷甲硫氨酸分子印跡傳感器的制備方法，具體是基于分子印跡特異性識(shí)別作用，用于檢測(cè)藥品、生物樣品中的S-腺苷甲硫氨酸技術(shù)。

背景技術(shù)

細(xì)胞內(nèi)的甲基化反應(yīng)存在通用甲基供體—S-腺苷甲硫氨酸（S-Adenosylmethionine，AdoMet，SAM），SAM含有活性甲基，細(xì)胞內(nèi)幾乎所有用于甲基化修飾的甲基都來自SAM甲硫高能鍵。由于甲基化反應(yīng)的廣泛性，可以說，SAM是細(xì)胞內(nèi)參加反應(yīng)的重要性僅次于ATP的一種輔酶，細(xì)胞內(nèi)SAM濃度的微小改變，便會(huì)對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化和功能產(chǎn)生重大影響。SAM在細(xì)菌體內(nèi)主要是由SAM合成酶（MetK）通過甲硫氨酸(Met)和ATP來合成。當(dāng)E.coli的SAM合成酶水平下降，造成細(xì)胞內(nèi)甲基供體SAM缺乏時(shí)，細(xì)胞就不會(huì)正常分裂。如果將來自T3噬菌體的AdoMet水解酶基因?qū)?i>E.coli菌體細(xì)胞，使胞內(nèi)SAM水平下降時(shí)，大腸埃希氏菌也形成了不分裂的長(zhǎng)絲狀菌體。進(jìn)一步研究表明，絲狀菌體中，引發(fā)E.coli細(xì)胞分裂的Z環(huán)復(fù)合體裝配可以正常起始，但不會(huì)完成，而當(dāng)亮氨酸調(diào)節(jié)的SAM合成酶水平恢復(fù)正常，細(xì)胞內(nèi)甲基供體SAM不再缺乏時(shí)，細(xì)胞分裂也隨即恢復(fù)正常。很明顯，細(xì)菌細(xì)胞的生長(zhǎng)分裂與胞內(nèi)SAM濃度是密切相關(guān)的。

通用甲基供體SAM受甲基轉(zhuǎn)移酶催化去甲基后，生成的通用產(chǎn)物是S-腺苷高半胱氨酸（S-adenosylhomocystein，SAH），SAH被發(fā)現(xiàn)對(duì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)和核酸的甲基化過程具有普遍的反饋抑制作用，是轉(zhuǎn)甲基化反應(yīng)的有效競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑。在哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)，SAH通過SAH水解酶（SAH?hydrolase，SAHH）催化水解生成腺苷酸和高半胱氨酸（Parveen,?N.;?Cornell,?K.?A..?Methylthioadenosine/S-adenosylhomocysteine?nucleosidase,?a?critical?enzyme?for?bacterial?metabolism.?Mol?Microbiol,?20117，9(1)：7-20,），而在大多數(shù)病原微生物的細(xì)胞內(nèi)，SAH的代謝則采用完全不同的方式——通過S-腺苷高半胱氨酸核苷酶（S-adenosylhomocystein?nucleosidase，SAHN）催化裂解生成腺嘌呤和S-核糖基高半胱氨酸，SRH進(jìn)一步在S-核糖基高半胱氨酸酶(SRHH)的作用下生成高半胱氨酸和4,5二羥-2,3-乙酰基丙酮（4,5-dihydroxy-2,3-pentanedione，DPD），高半胱氨酸最后通過幾種甲硫氨酸合成酶（MetH、MetE）重新生成SAM的前體——甲硫氨酸，或者經(jīng)過多步酶催化生成半胱氨酸。

目前，已報(bào)道的測(cè)定SAM的方法有HPLC、分光光度法。都依賴甲基轉(zhuǎn)移酶、S-腺苷高半胱氨酸核苷酶和S-核糖基高半胱氨酸酶的催化作用將SAM分解為高半胱氨酸，再對(duì)高半胱氨酸顯色反應(yīng)，操作比較繁瑣，準(zhǔn)確度也不理想。由于樣品的基質(zhì)比較復(fù)雜，給檢測(cè)帶來了困難，因此，找到一種選擇性好、靈敏度高、操作簡(jiǎn)便、快速的檢測(cè)SAM的方法十分重要的意義。

分子印跡技術(shù)是當(dāng)前開發(fā)具有分子識(shí)別功能的高選擇性材料的主要方法之一，它是通過在模板分子周圍形成一個(gè)高度交聯(lián)的剛性高分子，除去模板分子后在分子印跡聚合物的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)中留下具有結(jié)合能力的識(shí)別位點(diǎn)，對(duì)模板分子表現(xiàn)出高選擇識(shí)別性能的一種技術(shù)。這項(xiàng)技術(shù)以其構(gòu)效預(yù)定性和特異識(shí)別性越來越受到人們的關(guān)注，已經(jīng)成功用于固相萃取或微固相萃取，親和色譜或毛細(xì)管電泳及傳感器等領(lǐng)域。

依據(jù)此技術(shù)制備的分子印跡傳感器，應(yīng)用于藥物分析、環(huán)境保護(hù)及生命科學(xué)研究中起著十分重要的作用。將功能分子以適當(dāng)方式修飾到電極上，制備選擇性好、靈敏度高、有一定使用壽命可再生的電化學(xué)傳感器成為分析科學(xué)工作者努力探索的課題。但是傳統(tǒng)的印跡方法所制備的印跡膜厚度難以控制，高交聯(lián)度使得電子傳遞速度和響應(yīng)慢、檢測(cè)下限高而且再生和可逆性差，影響分子印跡技術(shù)在電化學(xué)傳感器中的應(yīng)用。因此，建立一種靈敏、快速、簡(jiǎn)便、特異性高、重復(fù)性好經(jīng)濟(jì)使用的檢測(cè)方法，對(duì)研究人員、生產(chǎn)企業(yè)、質(zhì)控人員、進(jìn)出口商檢、政府管理部門等的迫切需要的，對(duì)食品、藥品、環(huán)境安全中的SAM含量準(zhǔn)確定量測(cè)定十分必要，對(duì)于SAM生產(chǎn)和藥理研究也具有重要的意義。

?

發(fā)明內(nèi)容