[發明專利]一種體外快速增殖瘧原蟲成熟裂殖體的方法

有效

• 申請號: 201410186288.6
• 申請日: 2014-05-05
• 公開（公告）號: CN103923837A
• 公開（公告）日: 2014-07-16
• 發明（設計）人: 付雍;徐文岳;丁艷
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第三軍醫大學
• 主分類號: C12N1/10
• 分類號: C12N1/10;C12R1/90
• 代理公司: 北京同恒源知識產權代理有限公司 11275
• 代理人: 趙榮之

1.體外快速增殖瘧原蟲成熟裂殖體的方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)選擇原蟲率為25～30％的液氮凍存瘧原蟲，將其置于37℃恒溫水浴鍋內迅速解凍，離心，沉淀用瘧原蟲培養基重懸后再加入瘧原蟲培養基洗滌，離心收集沉淀，所述瘧原蟲培養基為含有胎牛血清、紅細胞、肝素、青霉素和鏈霉素的RPMI1640培養基；

(2)將步驟(1)所得沉淀用所述瘧原蟲培養基重懸，再加入所述瘧原蟲培養基混勻，在培養液中灌輸N₂、CO₂和O₂的混合氣體，灌輸完畢立即封閉瓶口，然后置于37℃、100r/min的條件下培養12～14小時；

(3)取新鮮配制的體積分數為72％Percoll分離液，然后向分離液中加入步驟(2)的培養液，并用水平式離心機在350g條件下離心25min，離心完畢，取中間層液體，然后用所述瘧原蟲培養基清洗，離心棄上清，得瘧原蟲成熟裂殖體。

2.根據權利要求1所述體外培養快速增殖瘧原蟲成熟裂殖體的方法，其特征在于：所述瘧原蟲培養基中胎牛血清的體積分數為20％，紅細胞的體積分數為10％，肝素的濃度為75000單位/L，青霉素的濃度為10⁵單位/L，鏈霉素的濃度為100mg/L。

3.根據權利要求1所述體外培養快速增殖瘧原蟲成熟裂殖體的方法，其特征在于：所述步驟(2)中，所述混合氣體中N₂、CO₂和O₂的體積分數分別為90％、5％和5％。

4.根據權利要求1所述體外培養快速增殖瘧原蟲成熟裂殖體的方法，其特征在于：所述步驟(2)中，所述混合氣體的灌輸時間為90s。

5.根據權利要求1-4任一項所述體外培養快速增殖瘧原蟲成熟裂殖體的方法，其特征在于：所述體積分數為72％Percoll分離液的制備方法為取Percoll原液與濃度為1.5M的NaCl按體積比為1:9混合，然后濃度為0.15M的NaCl稀釋至Percoll體積分數為72％。