[發明專利]一種高純度藻藍蛋白的制備方法

無效

• 申請號: 201410186021.7
• 申請日: 2014-04-30
• 公開（公告）號: CN103992402A
• 公開（公告）日: 2014-08-20
• 發明（設計）人: 歐瑜;袁志軍;李靖
• 申請（專利權）人: 中國藥科大學
• 主分類號: C07K14/795
• 分類號: C07K14/795;C07K1/36;C07K1/30;C07K1/18
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種高純度藻藍蛋白的制備方法，其特征在于：所述方法的步驟包括：

(1)將螺旋藻粉與磷酸鹽緩沖液按一定比例混合，常溫避光攪拌至完全混懸。

(2)將步驟(1)中的螺旋藻液反復凍融7-10次，離心收集上清液。

(3)向上述(2)中的上清液中分兩步加入硫酸銨固體，硫酸銨飽和濃度分別為20％-30％和40％-60％，兩步分別離心，第一步離心取上清液，第二步離心取沉淀，所得的沉淀用磷酸鹽緩沖液透析除鹽，得到藻藍蛋白粗提液。

(4)將上述(3)的藻藍蛋白粗提液上樣于弱陰離子交換柱，進行梯度洗脫，收集A₆₂₀/A₂₈₀>3的流出組分。

(5)將上述(4)收集組分透析除鹽后，上樣于強陰離子交換柱，進行梯度洗脫，收集A₆₂₀/A₂₈₀>4的流出組分。

(6)將上述(5)收集組分中加入硫酸銨固體，硫酸銨飽和濃度達到40％，4℃靜置8小時以上，離心除去上清液得到藻藍蛋白沉淀，此沉淀用少量磷酸鹽緩沖液溶解透析后得到高純度藻藍蛋白。

2.根據權利要求1所述的一種高純度藻藍蛋白的制備方法，其特征在于，步驟(1)中螺旋藻粉與磷酸鹽緩沖液(0.05mol/L)的比例為1∶10-1∶15(質量/體積)，混合后常溫避光攪拌2個小時。

3.根據權利要求1所述的一種高純度藻藍蛋白的制備方法，其特征在于，步驟(4)中弱陰離子交換介質為DEAE?Sepharose?FF，梯度洗脫條件為含有0.1-0.5mol/L?NaCl，pH7.0，0.01mol/L磷酸鹽緩沖液。

4.根據權利要求1所述的一種高純度藻藍蛋白的制備方法，其特征在于，步驟(5)中強陰離子交換介質為SOURCE30Q，梯度洗脫條件為含有0-0.3mol/L?NaCl，pH7.0，0.01mol/L磷酸鹽緩沖液。