[發明專利]一種徳舍瑞林的合成方法

在審

• 申請號: 201410184663.3
• 申請日: 2014-05-04
• 公開（公告）號: CN104004054A
• 公開（公告）日: 2014-08-27
• 發明（設計）人: 張旭光;汪國興
• 申請（專利權）人: 安徽瀚海博興生物技術有限公司
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 北京愛普納杰專利代理事務所(特殊普通合伙) 11419
• 代理人: 何自剛;王玉松

1.一種徳舍瑞林的合成方法，其特征在于，以2-氯三苯甲基氯樹脂為原料，在堿性條件下與芴甲氧羰基保護脯氨酸的羧基相連，得到芴甲氧羰基保護脯氨酸-2氯三苯甲基氯樹脂，再通過接肽反應依次接入徳舍瑞林剩余氨基酸，用全保護切割試劑裂解獲得全保護9肽片段，再通過乙胺化獲得全保護徳舍瑞林片段，最后裂解全保護徳舍瑞林片段獲得徳舍瑞林粗品。

2.權利要求1所述方法，其特征在于，步驟如下：

1)制備芴甲氧羰基保護脯氨酸-2氯三苯甲基氯樹脂；

2)在步驟1)所得的芴甲氧羰基保護脯氨酸-2氯三苯甲基氯樹脂上依次接入徳舍瑞林的剩余氨基酸，獲得9肽樹脂；

3)用全保護切割試劑裂解步驟2)所得的9肽樹脂，獲得全保護9肽片段；

4)乙胺化步驟3)所得全保護9肽片段，獲得全保護徳舍瑞林片段；

5)裂解步驟4)所得全保護徳舍瑞林片段，獲得徳舍瑞林粗品。

3.權利要求1或2所述方法，其特征在于，步驟1)制備所述芴甲氧羰基保護脯氨酸-2氯三苯甲基氯樹脂，具體為用二氯甲烷浸泡2氯三苯甲基氯樹脂，充分溶脹后吹干，加入接肽試劑溶解的芴甲氧羰基保護脯氨酸反應后吹干，再分別用N,N-二甲基甲酰胺和甲醇洗滌吹干，獲得芴甲氧羰基保護脯氨酸2-氯三苯甲基氯樹脂；

所述接肽試劑由N,N-二異丙基乙胺，N,N-二甲基甲酰胺按體積比1:15混合得到，2-氯三苯甲基氯樹脂的體積濃度為5-20ml/g，芴甲氧羰基保護脯氨酸摩爾數為2-氯三苯甲基氯樹脂的1.5-2倍。

4.權利要求1或2所述方法，其特征在于，步驟2)所述向芴甲氧羰基保護脯氨酸-2氯三苯甲基氯樹脂依次接入徳舍瑞林的剩余氨基酸時，每次接入氨基酸均經過脫保護反應和接肽反應。

5.權利要求4所述方法，其特征在于，所述脫保護反應，條件為脫保護劑哌啶：N,N-二甲基甲酰胺體積比＝1:4，脫保護劑相對于被接肽樹脂的添加量為5-20ml/g樹脂，反應溫度為20-25℃，反應時間為5-15min；

所述接肽反應，條件為接肽試劑N,N-二異丙基乙胺：N,N-二甲基甲酰胺體積比＝1:15，被接物體積濃度為5-20ml/g，接入物摩爾數為被接物的2-3倍，反應溫度為20-25℃，反應時間為1-1.5h。

6.權利要求1或2所述方法，其特征在于，步驟3)所述用全保護切割試劑裂解，具體為向步驟2)所得的9肽樹脂中加入體積比為1:99的三氟乙酸和二氯甲烷中反應1-3小時，過濾，收集濾液，將濾液減壓蒸餾，獲得全保護的9肽片段。

7.權利要求2所述方法，其特征在于，步驟4)所述乙胺化，具體為將1-羥基苯并三唑加入到步驟3)所得的全保護9肽片段中，再加入二異丙基碳二亞胺室溫下反應24小時后減壓蒸餾，獲得全保護的德舍瑞林片段。

8.權利要求1或2所述方法，其特征在于，步驟5)所述裂解全保護的德舍瑞林片段，具體為將步驟4)所得的全保護的德舍瑞林片段加入預冷至0-10℃的切肽試劑中，反應2-3小時，加入乙醚沉淀，收集沉淀物，用乙醚淋洗3次，真空干燥，獲得德舍瑞林粗品。

9.權利要求8所述方法，其特征在于，所述切肽試劑，是三氟乙酸，三異丙基硅烷和水按體積比95:2.5:2.5組成的混合物。

10.權利要求1或2所述方法，其特征在于，具體步驟如下：

1)取150g2-氯三苯甲基氯樹脂，用1000ml二氯甲烷浸泡，使樹脂充分溶脹，再取91.1g芴甲氧羰基保護脯氨酸，用1000ml接肽試劑溶解，加入反應器，20-25℃反應1.5h后吹干，分別用N,N-二甲基甲酰胺和甲醇洗滌吹干，獲得芴甲氧羰基保護脯氨酸2-氯三苯甲基氯樹脂；

2)以步驟1)所的芴甲氧羰基保護脯氨酸2-氯三苯甲基氯樹脂為被接物，按照徳舍瑞林9肽序列，從脯氨酸端依次接入精氨酸、亮氨酸、色氨酸、酪氨酸、絲氨酸、色氨酸、組氨酸和焦谷氨酸；

每次接入前，用向被接物中加1000ml脫保護試劑，室溫下反應15分鐘，吹干，分別用N,N-二甲基甲酰胺和甲醇洗滌3次，吹干，再取540mmol接入物，用173.4g?O-(苯并三唑-1-氧)-N,N,N,N-四甲基脲鎓六氟硼酸鹽，72.9g1-羥基苯并三唑，用1000ml接肽試劑溶解，加入反應器，20-25℃反應1.5h，吹干后再分別用N,N-二甲基甲酰胺和甲醇洗滌3次，吹干，接完焦谷氨酸后獲得9肽樹脂；

3)將512.3g步驟2)所的9肽樹脂轉移至5000ml的容器中，加入3500ml預先配制好的體積比為1:99的三氟乙酸和二氯甲烷中反應2.5小時，過濾，收集濾液，將濾液減壓蒸餾，獲得361.2g全保護的9肽片段；

4)將26.1g1-羥基苯并三唑和27.2g乙胺鹽酸鹽加入到512.3g步驟3)所得全保護的9肽片段中，再加入39ml二異丙基碳二亞胺，20-25℃下反應24h，減壓蒸餾，獲得全保護的德舍瑞林片段；

5)將步驟4)所得的全保護的德舍瑞林片段中加入到3500ml預冷至0-10℃的切肽試劑，反應2-3小時，加入10000ml乙醚沉淀，收集沉淀物，用乙醚淋洗3次，真空干燥，獲得德舍瑞林粗品。