[發(fā)明專利]一種微量多肽化學(xué)衍生體系及衍生方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410184193.0
• 申請日: 2014-05-04
• 公開（公告）號: CN103983716A
• 公開（公告）日: 2014-08-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 紀(jì)建國;王青松;安明瑞
• 申請（專利權(quán)）人: 北京大學(xué)
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

1.一種微量多肽化學(xué)衍生體系，該體系由置于Eppendorf槍頭中的、由上至下的三層填料層組成；其中，最上層的填料為反相硅膠，中間層的填料為磺酸基陽離子交換鍵合硅膠，最下層的填料為反相硅膠。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化學(xué)衍生體系，其特征在于，各填料層的厚度為3～5mm。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化學(xué)衍生體系，其特征在于，各填料的粒徑為3～10μm。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化學(xué)衍生體系，其特征在于，所述反相硅膠選用C₈或C₁₈，優(yōu)選為C₈。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化學(xué)衍生體系，其特征在于，所述Eppendorf槍頭為實(shí)驗(yàn)室常用Eppendorf槍頭，規(guī)格為200μl。

6.權(quán)利要求1所述微量多肽化學(xué)衍生體系的制備方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

1)將一片直徑為1～2mm的特氟龍薄膜水平放置到Eppendorf槍頭底部；

2)將反相硅膠懸濁液緩慢加入特氟龍薄膜之上，進(jìn)行離心，最下層即得；

3)將磺酸基陽離子交換鍵合硅膠懸濁液緩慢加入步驟2)所得最下層之上，進(jìn)行離心，中間層即得；

4)將反相硅膠懸濁液緩慢加入步驟3)所得中間層之上，進(jìn)行離心，微量多肽化學(xué)衍生體系即得；

其中，各離心步驟的離心機(jī)轉(zhuǎn)速為1000×g，離心時(shí)間為5min。

7.一種應(yīng)用權(quán)利要求1所述微量多肽化學(xué)衍生體系進(jìn)行多肽正電荷衍生的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

1)衍生體系的平衡；2)樣品與正電荷衍生試劑的載入；3)正電荷衍生反應(yīng)；4)副產(chǎn)物的洗脫；5)衍生多肽的脫鹽；6)衍生多肽的洗脫。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的多肽正電荷衍生方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

1)使用45％乙腈100μL進(jìn)行系統(tǒng)的清洗，使用0.1％三氟乙酸溶液100μL進(jìn)行系統(tǒng)的平衡；

2)將多肽樣品與TMPP-Ac-OSu衍生試劑以質(zhì)量比1:2溶解于含5％乙腈與0.1％三氟乙酸的溶液100μL，載入微量反應(yīng)體系最上層；

3)載入pH8.2、濃度為20mmol/L的碳酸氫鈉緩沖液100μL，引發(fā)衍生反應(yīng)；室溫下孵育2小時(shí)后，使用0.1％三氟乙酸溶液100μL進(jìn)行清洗，終止衍生反應(yīng)；

4)使用pH3.0、含有5mmol/L磷酸二氫鉀和45％乙腈的緩沖液A100μL進(jìn)行洗脫，將衍生多肽產(chǎn)物從最上層洗脫下來并結(jié)合到中間層，同時(shí)將以TMPP-Ac-OH為主的衍生反應(yīng)副產(chǎn)物除去；使用pH3.0、含有5mmol/L磷酸二氫鉀、500mmol/L氯化鉀和45％乙腈的緩沖液B100μL進(jìn)行洗脫，將衍生多肽產(chǎn)物從中間層洗脫下來并結(jié)合到最下層；

5)使用0.1％三氟乙酸溶液100μL進(jìn)行洗脫，去除衍生反應(yīng)中的鹽雜質(zhì)；

6)使用45％乙腈100μL進(jìn)行洗脫，衍生多肽樣品即得。

9.權(quán)利要求1所述微量多肽化學(xué)衍生體系在多肽從頭測序中的應(yīng)用，其特征在于，將由所述體系進(jìn)行化學(xué)衍生得到的衍生多肽用于質(zhì)譜分析。