[發明專利]含雙歧桿菌發酵液的新型抑菌組合物

在審

• 申請號: 201410179432.3
• 申請日: 2014-04-30
• 公開（公告）號: CN103977032A
• 公開（公告）日: 2014-08-13
• 發明（設計）人: 許恒毅;況慧娟;張婉怡;聶麗菊;葉稱連
• 申請（專利權）人: 南昌大學
• 主分類號: A61K35/74
• 分類號: A61K35/74;A61K33/30;A61K47/46;A61P31/04
• 代理公司: 南昌新天下專利商標代理有限公司 36115
• 代理人: 施秀瑾

技術領域

本發明屬于醫藥領域，尤其涉及一種抑菌物。

背景技術

雙歧桿菌是一種常見的腸道益生菌用。雙歧桿菌能很好的抑制常見腐敗菌和低溫細菌，它能在腸道內通過細胞磷壁酸與腸黏膜上皮細胞相互作用,與其他厭氧菌共占據腸黏膜表面，構成一個生物學屏障，阻止致病菌的入侵。雙歧桿菌還能抑制有害細菌的生長從而抑制腐敗菌毒害物質如吲哚、甲酚、胺等的產生，并將其作為自身營養源進行代謝。雙歧桿菌的主要抗菌機制是通過酵解產生有機酸來調節機體環境中的pH值使其降低，過酸的環境使腐敗菌和致病菌的生長繁殖得到抑制。故以雙歧桿菌為中心的微生態制劑被廣泛開發和利用。

然而，隨著抗生素等抑菌藥物的濫用，越來越多的微生物通過變異產生了耐藥性，且一些由耐藥性細菌引起的疾病無法醫治，同時也使得具備高效、廣譜且不易產生耐藥性等優點的納米氧化鋅抑菌劑引起人們的重視。隨著納米技術的高速發展，金屬氧化物氧化鋅被加工成納米氧化鋅后，其比表面積極大，表現出明顯的表面效應、小尺寸效應和宏觀隧道效應，這種活性極強的納米氧化鋅顆粒具備超強的抗菌能力。但是納米氧化鋅難溶于水，這對納米氧化鋅的抗菌能力有明顯的抑制作用。

發明內容

針對納米氧化鋅難以溶于水以至于難以體現其抑菌性能的問題，本發明人經過大量實驗，發現雙歧桿菌發酵液產酸能增強納米氧化鋅的溶解度。同時，雙歧桿菌能代謝產生有機酸、過氧化氫和細菌素等物質，這些物質也能夠抑制病原菌和腐敗菌，故雙歧桿菌發酵液能增強納米氧化鋅的抑菌性能，同時使微生態制劑更具有特殊保健功能。本發明的目的在于提供一種雙歧桿菌和納米氧化鋅組合物，提高納米氧化鋅的溶解度，減少微生物耐酸性的產生。

本發明提供如下技術方案：

含雙歧桿菌發酵液的新型抑菌組合物，含有雙歧桿菌發酵液、納米氧化鋅；

所述雙歧桿菌發酵液制備包括如下步驟：取雙歧桿菌單菌落接種于5mL的MRS培養液中，厭氧培養至菌濃度在10⁸?CFU/mL的雙歧桿菌發酵液；

所述納米氧化鋅為10mg/mL的納米氧化鋅膠體溶液，粒徑為200nm。

抑制大腸桿菌O157、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌和臘樣芽胞桿菌時，雙歧桿菌發酵液與納米氧化鋅的體積比為1:1。

如權利要求1-2任一所述抑菌組合物在制備抑制大腸桿菌O157藥物中的應用。

如權利要求1-2任一所述抑菌組合物在制備抑制沙門氏菌藥物中的應用。

如權利要求1-2任一所述抑菌組合物在制備抑制金黃色葡萄球菌藥物中的應用。

如權利要求1-2任一所述抑菌組合物在制備抑制臘樣芽孢桿菌藥物中的應用。

本發明的新型抑菌組合物中雙歧桿菌發酵液產酸能增強納米氧化鋅的溶解度。同時，雙歧桿菌能代謝產生有機酸、過氧化氫和細菌素等物質，這些物質也能夠抑制病原菌和腐敗菌，雙歧桿菌發酵液能協同增強納米氧化鋅的抑菌性能，同時使微生態制劑更具有特殊保健功能。

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具體實施方式

實施例1

1，雙歧桿菌發酵液制備包括如下步驟：以雙歧桿菌出發菌株，MRS(含0.05%的半胱氨酸鹽酸鹽)為液體培養基，接雙歧桿菌單菌落于5mL的MRS(含0.05%的半胱氨酸鹽酸鹽)液體培養基中，于37℃厭氧培養箱中恒溫培養12h，即可以得到菌濃度在10⁸?CFU/mL的雙歧桿菌發酵液。

2，納米氧化鋅膠體溶液的制備：取上海阿拉丁有限公司生產的納米氧化鋅0.01g溶于1mL的蒸餾水中，震蕩混勻得到10mg/mL的納米氧化鋅膠體溶液，粒徑為200nm。

3、雙歧桿菌發酵液和納米氧化鋅協同抑菌作用。

a?細菌的培養

挑取LB瓊脂培養基上的大腸桿菌O157的單菌落于10mL?LB肉湯培養基中，置于37℃培養箱中培養12?h，再按1％的接種量接種于5?mL的LB肉湯培養基中，37℃培養5h后，取1?mL上述菌液用1xPBS水連續稀釋兩個梯度，最終的菌液大約為10⁸?CFU/mL。

b?雙歧桿菌發酵液和納米氧化鋅在抑菌性能上的協同作用

分別取900μL上述已稀釋好的菌液于1.5?mL?滅菌的離心管中，向1號離心管中加

入100μL雙歧桿菌發酵液，向2號離心管中加入100μL?濃度為10?mg/mL?的納米氧化鋅膠體溶液，向3號離心管中加入100μL納米氧化鋅膠體溶液和雙歧桿菌發酵液的混合液（1:1），向4號離心管中加入100μL1xPBS水，置于37?℃恒溫震蕩培養箱中培養5?h。每組實驗平行三次。