[發(fā)明專利]自然無血凝性水貂腸炎病毒株MEV-NH及其制備方法和應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410177502.1
• 申請日: 2014-04-29
• 公開（公告）號: CN103952378A
• 公開（公告）日: 2014-07-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 譚斌;張淑琴;陳立志;吳威;李光玉;程世鵬
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學院特產(chǎn)研究所;吉林特研生物技術(shù)有限責任公司
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;A61K39/12;A61P31/20;C12R1/93
• 代理公司: 長春菁華專利商標代理事務(wù)所 22210
• 代理人: 王丹陽

1.自然無血凝性水貂腸炎病毒株MEV-NH，其特征在于，該水貂腸炎病毒(Mink?enteritis?virus)NH于2014年03月11日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為CGMCC?No.8858。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的自然無血凝性水貂腸炎病毒株MEV-NH，其特征在于，其VP2基因序列如序列表SEQ?IE?NO?3所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的自然無血凝性水貂腸炎病毒株MEV-NH，其特征在于，其VP2氨基酸序列如序列表SEQ?IE?NO4所示。

4.制備權(quán)利要求1所述的自然無血凝性水貂腸炎病毒株MEV-NH的方法，其特征在于，該方法的條件和步驟如下：

a、將疑似水貂病毒腸炎發(fā)病貂的稀糞用無血清MEM制成體積比為10％的懸液，無血清MEM中青霉素和鏈霉素各為2000U/mL，凍融一次，以5000r/min離心10min，取上清，0.22μm濾膜除菌，-80℃保存；

b、將處理好的病料上清液按3％的比例同步接種于CRFK細胞，于37℃、5％的CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4～5天，觀察細胞病變；

c、病毒接種細胞CPE達80％，收取病毒培養(yǎng)物，反復(fù)凍融三次，用收獲培養(yǎng)物接種細胞進行病毒傳代得到水貂腸炎病毒(Mink?enteritis?virus)NH。

5.如權(quán)利要求1所述的自然無血凝性水貂腸炎病毒株MEV-NH作為驗證疫苗免疫原性的檢驗強毒株的應(yīng)用。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的自然無血凝性水貂腸炎病毒株MEV-NH作為驗證疫苗免疫原性的檢驗強毒株的應(yīng)用，其特征在于，用1～2月齡健康水貂10只，隨機選取5只作為免疫組，每只各注射接種1頭份疫苗，剩余5只作為對照組，每只各注射生理鹽水2ml；21天后，所有10只水貂都接種水貂腸炎病毒MEV-NH流行株細胞培養(yǎng)物1ml，連續(xù)觀察14天，對照組水貂全部表現(xiàn)出水貂病毒性腸炎癥狀，而免疫疫苗組水貂全部未表現(xiàn)出水貂病毒性腸炎癥狀，說明該疫苗能夠?qū)λ醍a(chǎn)生無血凝性MEV-NH流行株的免疫保護作用。