[發明專利]實現家蠶轉基因長期穩定性的piggyBac載體及其制備方法

有效

• 申請號: 201410177428.3
• 申請日: 2014-04-29
• 公開（公告）號: CN103923941A
• 公開（公告）日: 2014-07-16
• 發明（設計）人: 夏慶友;王峰;徐漢福;王元成;王日遠;趙萍
• 申請（專利權）人: 西南大學
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/66
• 代理公司: 北京同恒源知識產權代理有限公司 11275
• 代理人: 趙榮之

1.實現家蠶轉基因長期穩定性的piggyBac載體，其特征在于：所述piggyBac載體含有3個末端反向重復序列，位于中間位置的末端反向重復序列為193bp且與左側末端反向重復序列的方向相同。

2.根據權利要求1所述實現家蠶轉基因長期穩定性的piggyBac載體，其特征在于：所述位于中間位置的末端反向重復序列的序列如SEQ?ID?NO.5所示。

3.根據權利要求1或2所述實現家蠶轉基因長期穩定性的piggyBac載體，其特征在于：所述piggyBac載體依次包括左側反向重復序列，外源基因表達框Ⅰ、位于中間位置的末端反向重復序列、外源基因表達框Ⅱ和右側末端反向重復序列。

4.根據權利要求3所述實現家蠶轉基因長期穩定性的piggyBac載體，其特征在于：所述外源基因表達框Ⅰ與位于中間位置的末端反向重復序列之間還包括限制性酶切位點。

5.根據權利要求4所述實現家蠶轉基因長期穩定性的piggyBac載體，其特征在于：所述限制性酶切位點為AscI限制性酶切位點。

6.根據權利要求5述實現家蠶轉基因長期穩定性的piggyBac載體，其特征在于：所述piggyBac載體的序列如SEQ?ID?NO.7所示。

7.權利要求1-6任一項所述實現家蠶轉基因長期穩定性的piggyBac載體的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：以pBac[3xp3-EGFPaf]載體為模板，設計擴增左側反向重復序列的引物，然后進行PCR擴增，然后將擴增產物通過MluI和AscI酶切，酶切后插入到pBac[3xp3-EGFPaf]載體的AscI位點，篩選插入方向與pBac[3xp3-EGFPaf]載體的左側反向重復序列同向的載體，得實現家蠶轉基因長期穩定性的piggyBac載體。

8.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于：所述擴增左側反向重復序列的引物如SEQ?ID?NO.2和SEQ?ID?NO.3所示。