[發明專利]通過離體挽救培養獲得草莓遠緣雜種的方法及培養基

有效

• 申請號: 201410175221.2
• 申請日: 2014-04-28
• 公開（公告）號: CN105010123B
• 公開（公告）日: 2017-06-09
• 發明（設計）人: 高清華;殷麗青;段可;葉正文;鄭宏清;張麗勍
• 申請（專利權）人: 上海市農業科學院
• 主分類號: A01H1/02
• 分類號: A01H1/02;A01H4/00
• 代理公司: 上海開祺知識產權代理有限公司31114
• 代理人: 費開逵,李蘭英

1.通過離體挽救培養獲得草莓遠緣雜種的方法，包括以下步驟：

1)雜交授粉：以栽培草莓品種和野生草莓品種為雜交親本進行雜交授粉；

2)果實消毒：將授粉后5～35天其種子未完全發育的果實取下，于4℃～7℃存放3～4小時，取大小為1～3厘米的果實，先用70％的酒精表面消毒10～30秒，再用0.1wt％的升汞溶液滅菌1～3分鐘，之后用無菌水清洗3～5遍，吸干果實表面水分；

3)未成熟胚剝離：在無菌條件下，將滅菌的果實取下種子剝離其幼胚，立即接種于誘導培養基中離體培養，先暗培養7天，再進行光照培養，誘導培養21～28天后獲得膨大的胚；

光照培養條件為：光照時間10小時/天，光照強度2000～3000Lx，培養溫度24±1℃；

誘導培養基：1/2MS基本培養基，蔗糖30～50g/L，瓊脂6～8g/L，吲哚丁酸IBA0.3～0.5mg/L，pH5.5～5.8；

4)胚萌發培養：將膨大的胚剝除胚乳后置于胚萌發培養基中進行挽救培養，培養30～35天后幼胚萌發，光照培養條件同步驟3)；

胚萌發培養基：1/2MS基本培養基，蔗糖30～50g/L，瓊脂6～8g/L，萘乙酸NAA0.2～0.5mg/L，6-芐氨基腺嘌呤6-BA1.2～1.5mg/L，pH5.5～5.8；

5)增殖培養：將萌發的幼胚接種至增殖培養基中，光照培養條件和培養基組成與步驟4)相同，每10～15天繼代增殖1次，獲得芽苗；

6)生根培養：將經過1～4次繼代增殖培養的芽苗從芽叢中切下，轉到生根培養基中促使其生根，生根培養45～60天，得到生根的草莓胚苗，培養溫度24±1℃；

生根培養基：1/2MS基本培養基，蔗糖30～50g/L，瓊脂6～8g/L，吲哚丁酸IBA0.2～0.5mg/L，6-芐氨基腺嘌呤6-BA0.02～0.05mg/L，水解酪蛋白LH0.2～0.4g/L，腺嘌呤Ad4～6mg/L，pH5.5～5.8；

7)煉苗移栽：開瓶后在瓶底加水，煉苗3～4天，然后將生根苗從培養瓶中取出，清水洗凈根系附帶的培養基，然后移栽在栽培基質中遮光處理2～3天，在溫室中保持相對濕度75％～85％進行煉苗，培養20～30天即可移入大田種植。

2.根據權利要求1所述的通過離體挽救培養獲得草莓遠緣雜種的方法，其特征在于，步驟7)所述的煉苗移栽過程為：將生根后的草莓胚苗，移栽前將瓶蓋打開一條縫，注入10～15毫升無菌水進行自然馴化2～3天，接著完全揭開瓶蓋并添加10～15毫升蒸餾水鍛煉1天，將生根苗從培養瓶中取出，清水洗凈根系附帶的培養基，然后移栽在滅菌的栽培基質中遮光遮蔭處理2～3天，在溫室中保持相對濕度75％～85％進行煉苗，培養20～30天即可移入大田種植。

3.根據權利要求1或2所述的通過離體挽救培養獲得草莓遠緣雜種的方法，其特征在于，所述的栽培草莓品種為久香、甜查理或豐香，野生草莓品種為野生黃毛草莓。

4.用于離體挽救培養獲得草莓遠緣雜種的培養基，其包括，誘導培養基、胚萌發培養基和生根培養基，其特征在于，

所述的誘導培養基，其由以下組分組成：1/2MS基本培養基，蔗糖30～50g/L，瓊脂6～8g/L，吲哚丁酸IBA0.3～0.5mg/L；

所述的胚萌發培養基，其由以下組分組成：1/2MS基本培養基，蔗糖30g～50g/L，瓊脂6g～8g/L，萘乙酸NAA0.2～0.5mg/L，6-芐氨基腺嘌呤6-BA1.2～1.5mg/L；

所述的生根培養基，其由以下組分組成：1/2MS基本培養基，蔗糖30g～50g/L，瓊脂6g～8g/L，吲哚丁酸IBA0.2～0.5mg/L，6-芐氨基腺嘌呤6-BA0.02～0.05mg/L，水解酪蛋白LH0.2～0.4g/L，腺嘌呤Ad4～6mg/L。