[發(fā)明專利]太子參環(huán)肽B標(biāo)準(zhǔn)品的制備方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410174961.4
• 申請(qǐng)日: 2014-04-28
• 公開（公告）號(hào): CN103923191A
• 公開（公告）日: 2014-07-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 譚寧華;趙麗梅;宋衛(wèi)武
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所
• 主分類號(hào): C07K7/64
• 分類號(hào): C07K7/64;C07K1/16
• 代理公司: 昆明協(xié)立知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 53108
• 代理人: 馬曉青

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種以中藥太子參為原料制備標(biāo)準(zhǔn)品太子參環(huán)肽B的提取分離純化方法。

背景技術(shù)

太子參（Pseudostellariae?Radix,‘Tai?Zi?Shen’）是石竹科植物孩兒參Pseudostellaria?heterophylla(Miq.)Pax?ex?Pax?et?Hoffm.的干燥塊根，別名異葉假繁縷，是常用中藥。現(xiàn)市售太子參主要來(lái)自安徽、貴州、福建、江蘇、山東等種植基地。味甘、微苦，平，歸脾、肺經(jīng)，具有益氣健脾、生津潤(rùn)肺等功效，用于脾虛體倦，食欲不振，病后虛弱，氣陰不足，自汗口渴，肺燥干咳，為補(bǔ)氣中藥中的一味清補(bǔ)之品，特別適合作為少兒、老年人、久病恢復(fù)病人的滋補(bǔ)佳品。現(xiàn)代藥理研究表明，太子參具有增強(qiáng)免疫、抗疲勞、抗應(yīng)激、抗氧化、抗衰老、抗真菌等多種藥理活性，而且在治療白細(xì)胞減少癥、心絞痛、肺炎、淋巴結(jié)核、糖尿病、繼發(fā)性再生障礙性貧血等癥方面取得了突破。

目前已報(bào)道從太子參中分離得到的化合物類型有環(huán)肽、皂苷、氨基酸、糖、油脂、揮發(fā)性物質(zhì)、磷脂及脂肪酸等，其成分與功效之間的關(guān)系至今尚不夠明確。很多學(xué)者認(rèn)為環(huán)肽類成分是太子參的特征性成分，1993年譚寧華等首先從太子參中發(fā)現(xiàn)了2個(gè)新環(huán)肽類成分太子參環(huán)肽A和B（Heterophyllin?A,B），現(xiàn)已從太子參中分離報(bào)道10多個(gè)環(huán)肽類成分，2010年版《中華人民共和國(guó)藥典》新增加了太子參環(huán)肽B含量測(cè)定指標(biāo)，建立了其HPLC含量測(cè)定方法，用于太子參藥材的質(zhì)量控制。

有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)品太子參環(huán)肽B的制備工藝的國(guó)內(nèi)外報(bào)道較少，現(xiàn)有技術(shù)中未見(jiàn)有可應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)的太子參環(huán)肽B的制備方法。因此，有必要尋找一種簡(jiǎn)便、安全、經(jīng)濟(jì)高效、可應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)的太子參環(huán)肽B的制備方法。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明的目的旨在針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，提供一種簡(jiǎn)單快速、樣品損失少、成本低、可控性和重現(xiàn)性好、適用于工業(yè)化生產(chǎn)的太子參環(huán)肽B標(biāo)準(zhǔn)品的制備方法，建立一種通過(guò)多種現(xiàn)代分離分析技術(shù)手段相結(jié)合的方法。

本發(fā)明的上述目的是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的：

太子參環(huán)肽B標(biāo)準(zhǔn)品的制備方法，包括以下步驟：

（1）提取：太子參藥材曬干，粉碎至粒徑20-80目，加入4-10倍體積的95%工業(yè)乙醇進(jìn)行熱回流提取，熱回流溫度75-85℃，提取時(shí)間2-4h，每次過(guò)濾后將殘?jiān)貜?fù)提取過(guò)程2-3次，合并提取液，減壓濃縮至比重1.1-1.2；

（2）前處理：向浸膏中加入5-15倍體積的95%工業(yè)乙醇于75-85℃熱回流溶解1-3h，冷卻靜置8-24h，過(guò)濾濃縮濾液，得到太子參環(huán)肽總提物；

（3）富集：將上述太子參環(huán)肽總提物用少量甲醇溶解，拌入拌樣用柱層析硅膠，干燥，加載于分離用層析硅膠柱床頂端，用氯仿-甲醇溶劑梯度洗脫，收集流出液，TLC檢測(cè)環(huán)肽成分，合并所有含環(huán)肽部分，回收溶劑，干燥得到太子參環(huán)肽B粗品，HPLC-MS分析，快速鎖定目標(biāo)產(chǎn)物；

（4）分離純化：取上述富集產(chǎn)物，甲醇溶解過(guò)濾，用制備型高效液相色譜進(jìn)行跟蹤分離純化，流動(dòng)相為乙腈-水溶液，根據(jù)HPLC-MS分析結(jié)果，收集太子參環(huán)肽B色譜峰流出液，回收溶劑，干燥得到純度98%以上的太子參環(huán)肽B純品。

上述步驟（1）中的太子參為石竹科植物孩兒參Pseudostellaria?heterophylla(Miq.)Pax?ex?Pax?et?Hoffm.的干燥塊根。

上述步驟（1）中熱回流提取所用溶劑為原藥材4-10倍體積的95%工業(yè)乙醇，提取時(shí)間2-4h，溫度75-85℃，每次過(guò)濾后將殘?jiān)貜?fù)提取過(guò)程2-3次，合并提取液，減壓濃縮至比重1.1-1.2。

上述步驟（2）中前處理所用溶劑為浸膏5-15倍體積的95%工業(yè)乙醇，熱回流溶解時(shí)間為1-3h，溫度75-85℃，冷卻靜置時(shí)間為8-24h。

上述步驟（3）中所用拌樣用柱層析硅膠為100-200目，用量為太子參環(huán)肽總提物重量的1-1.5倍，分離用柱層析硅膠為200-300目，用量為太子參環(huán)肽總提物的15-40倍。

上述步驟（3）中所用洗脫溶劑為氯仿-甲醇溶劑系統(tǒng)，梯度或等度洗脫：20-40:1(6-14BV)，6-12:1(6-14BV)。

上述步驟（3）中所用TLC環(huán)肽檢測(cè)方法：薄層板為硅膠G板，樣品點(diǎn)于硅膠G板上，用氯仿-甲醇（8:2-9:1）展開，揮掉溶劑后，在100-120℃用4-8NHCl溶液水解30-60min后，再噴灑2%-5%茚三酮乙醇溶液顯色劑，加熱后顯桔黃色至橙紅色斑點(diǎn)。