[發明專利]太子參環肽B標準品的制備方法

無效

• 申請號: 201410174961.4
• 申請日: 2014-04-28
• 公開（公告）號: CN103923191A
• 公開（公告）日: 2014-07-16
• 發明（設計）人: 譚寧華;趙麗梅;宋衛武
• 申請（專利權）人: 中國科學院昆明植物研究所
• 主分類號: C07K7/64
• 分類號: C07K7/64;C07K1/16
• 代理公司: 昆明協立知識產權代理事務所(普通合伙) 53108
• 代理人: 馬曉青

1.太子參環肽B標準品的制備方法，包括以下步驟：

（1）提取：太子參藥材曬干，粉碎至粒徑20-80目，加入太子參藥材4-10倍體積的95%工業乙醇進行熱回流提取，合并提取液、濃縮至比重為1.1-1.2的浸膏；

（2）前處理：向浸膏中加入5-15倍體積的95%工業乙醇熱回流溶解1-3h，冷卻靜置8-24h，過濾濃縮濾液，得到太子參環肽總提物；

（3）富集：將上述太子參環肽總提物用少量甲醇溶解，拌入拌樣用柱層析硅膠，干燥，加載于分離用層析硅膠柱床頂端，用氯仿-甲醇溶劑梯度洗脫，收集流出液，TLC檢測環肽成分，合并所有環肽部分，回收溶劑，干燥得到太子參環肽B粗品，HPLC-MS分析，快速鎖定目標產物；

（4）分離純化：取上述富集產物，甲醇溶解過濾，用制備型高效液相色譜進行跟蹤分離純化，流動相為乙腈-水溶液，根據HPLC-MS分析結果，收集太子參環肽B色譜峰流出液，回收溶劑，干燥得到純度98%以上的太子參環肽B純品。

2.按照權利要求1所述的太子參環肽B標準品的制備方法，其特征在于所述的步驟（1）中太子參為石竹科植物孩兒參Pseudostellaria?heterophylla(Miq.)Pax?ex?Pax?et?Hoffm.的干燥塊根。

3.按照權利要求1所述的太子參環肽B標準品的制備方法，其特征在于所述的步驟（1）中熱回流提取所用溶劑為原料4-10倍體積的95%工業乙醇，提取時間2-4h，溫度75-85℃，每次過濾后將殘渣重復提取過程2-3次，合并提取液，減壓濃縮至比重1.1-1.2。

4.按照權利要求1所述的太子參環肽B標準品的制備方法，其特征在于所述的步驟（2）中前處理所用溶劑為浸膏5-15倍體積的95%工業乙醇，熱回流溶解時間為1-3h，溫度75-85℃，冷卻靜置時間為8-24h。

5.按照權利要求1所述的太子參環肽B標準品的制備方法，其特征在于所述的步驟（3）中富集目標產物所用層析柱為硅膠柱，裝柱方法為濕法裝住，所用裝柱硅膠為200-300目柱層析硅膠，用量為太子參環肽總提物的15-40倍重量，上樣方法為干法上樣，拌樣用硅膠為100-200目柱層析硅膠，用量為太子參環肽總提物的1-1.5倍重量，洗脫溶劑為氯仿-甲醇溶劑梯度洗脫：20-40:1(6-14BV)，6-12:1(6-14BV)。

6.按照權利要求1所述的太子參環肽B標準品的制備方法，其特征在于所述的步驟（3）中TLC檢測環肽所用薄層板為硅膠G板，樣品點于硅膠G板上，用8:2-9:1的氯仿-甲醇展開，揮掉溶劑后，在100-120℃用4-8N?HCl溶液水解30-60min后，再噴灑2%-5%茚三酮乙醇溶液顯色劑，加熱后顯桔黃色至橙紅色斑點。

7.按照權利要求1所述的太子參環肽B標準品的制備方法，其特征在于所述的步驟（3）中HPLC-MS分析方法：HPLC色譜條件為：色譜柱：C18柱，柱溫：室溫，流動相：乙腈-水，乙腈在流動相中的比例為：0-20min，20%-32%；20-40min，32%；40-50min，32%-45%，流速：1.0ml/min，檢測：DAD檢測器，檢測波長：203nm；質譜條件為：電離方式為電噴霧離子源正離子模式，噴霧電壓3kV，椎孔電壓42V，離子源為450℃，霧化氣流速650L/Hr，輔助氣流量50L/Hr，碰撞能量38V，0.2秒內的質量掃描范圍為m/z100-1000。

8.按照權利要求1所述的太子參環肽B標準品的制備方法，其特征在于所述的步驟（4）中制備型高效液相色譜分離純化所用色譜柱為：C18柱，流動相為乙腈-水體系，乙腈在流動相中的比例為0-20min：15-32%，20-40min：32%，檢測波長203nm。