[發明專利]利用液相色譜串聯質譜測定血紅蛋白濃度的方法

無效

• 申請號: 201410174460.6
• 申請日: 2014-04-28
• 公開（公告）號: CN103954717A
• 公開（公告）日: 2014-07-30
• 發明（設計）人: 鄒琳;余朝文;張娟;袁召建;苗靜琨;劉浩;萬科星;劉珊
• 申請（專利權）人: 重慶醫科大學附屬兒童醫院
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 北京元本知識產權代理事務所 11308
• 代理人: 黎昌莉

1.一種測定血紅蛋白濃度的方法，其特征在于，包括以下步驟：

A、取血紅蛋白樣品進行分解，得珠蛋白多肽鏈的裂解片段；

B、對所述裂解片段進行分離，以分離獲得的一條或多條裂解片段為標志肽段，利用質譜進行定量測試；

C、設立已知濃度的血紅蛋白濃度梯度，按照本方法進行測定，建立質譜響應強度與血紅蛋白濃度的線性回歸方程，將待測樣品質譜響應強度值帶入方程計算，即得樣品的血紅蛋白濃度。

2.根據權利要求1所述的測定血紅蛋白濃度的方法，其特征在于：所述標志肽段為SEQ?ID?NO：1～11中的一條或多條。

3.根據權利要求1所述的測定血紅蛋白濃度的方法，其特征在于：所述步驟B采用液相色譜串聯質譜完成裂解片段的分離和定量測試。

4.根據權利要求3所述的測定血紅蛋白濃度的方法，其特征在于：所述液相色譜串聯質譜進行測試時，設置的主要參數如下：

液相色譜自動進樣器參數：沖洗體積：200ul，推針行程：50mm，沖洗流度：35ul/sec，進樣流速：5ul/sec，排氣時間：25min，浸潤時間：3sec，沖洗模式：Before?and?after，冷卻溫度：15℃，控制瓶推針行程：52mm；

液相色譜采樣時間程序：0.10s時流速為0.25ml/min，0.11s時流速為0.020ml/min，0.40s時流速為0.085ml/min，0.45s時流速為0.60ml/min，0.55s時停止；液相色譜流速為0.15ml/min；壓力允許范圍為0～15Mpa；

質譜儀參數：氣簾氣：25MPa，碰撞氣：5MPa，噴霧電壓：5500V，離子化溫度：350℃，霧化氣：30MPa，加熱輔助氣：40MPa，界面加熱器：on，掃描模式：Positive。

5.根據權利要求1至4任一項所述的測定血紅蛋白濃度的方法，其特征在于：所述步驟B中，采用質譜的多重反應監測模式，選擇兩個標志肽段，定量分析每個標志肽段的一對母離子/子離子組合對；或者選擇一個標志肽段，定量分析該標志肽段的兩對母離子/子離子組合對。

6.根據權利要求5所述的測定血紅蛋白濃度的方法，其特征在于：所述標志肽段的序列如SEQ?ID?NO：1所示，定量分析該標志肽段729.4/262.1m/z和729.4/430.2m/z的兩對母離子/子離子組合對。

7.根據權利要求1至4任一項所述的測定血紅蛋白濃度的方法，其特征在于：所述血紅蛋白樣品為干血濾紙片標本。

8.利用血紅蛋白濃度測定裝置測定血紅蛋白濃度的方法，其特征在于，所述測定裝置為液相色譜儀串聯的三重四級桿質譜儀，包括以下測定步驟：用酶消化血紅蛋白，得珠蛋白多肽鏈的裂解片段；用液相色譜儀串聯的三重四級桿質譜儀對裂解片段進行分離和定量分析，采用質譜的多重反應監測模式，以珠蛋白α鏈的裂解片段為標志肽段，選擇兩個標志肽段，定量分析每個標志肽段的一對母離子/子離子組合對；或者選擇一個標志肽段，定量分析該標志肽段的兩對母離子/子離子組合對；設立已知濃度的血紅蛋白濃度梯度，按照本方法進行測定，建立質譜響應強度與血紅蛋白濃度的線性回歸方程，將樣品質譜響應強度值帶入方程計算，即得樣品的血紅蛋白濃度。

9.基于血紅蛋白的裂解片段作為標志肽段在血紅蛋白濃度測定中的應用。

10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于：所述標志肽段為SEQ?ID?NO：1～11中的一條或多條。