[發明專利]抗喹乙醇和安普霉素的雙特異性單克隆抗體及其制備方法

在審

• 申請號: 201410173591.2
• 申請日: 2014-04-28
• 公開（公告）號: CN103951750A
• 公開（公告）日: 2014-07-30
• 發明（設計）人: 金仁耀;桑永玉
• 申請（專利權）人: 浙江工商大學
• 主分類號: C07K16/12
• 分類號: C07K16/12;C07K16/44;C12N5/20
• 代理公司: 杭州浙科專利事務所(普通合伙) 33213
• 代理人: 吳秉中

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種抗喹乙醇和安普霉素的雙特異性單克隆抗體及其制備方法。

背景技術

免疫分析法(Immunoassay，IA)起始于20世紀50年代，首先應用于體液大分子物質的分析，1960年，美國學者Yalow和Berson等將放射性同位素示蹤技術和免疫反應結合起來測定糖尿病人血漿中的胰島素濃度，創立了放射免疫分析技術。1968年，Oliver將地高辛同牛血清白蛋白結合，使之成為人工抗原，免疫動物后成功獲得了抗地高辛抗體，從而開辟了用免疫分析法測定小分子藥物的新領域。在RIA的基礎上，隨著新的標記物質的發現及新的標記方法的使用，以及電子計算機、自動控制技術的廣泛應用，派生出許多新的檢測技術，使免疫分析法逐漸發展成為一門新型的獨立學科。

由于免疫分析試劑在免疫反應中所體現出的獨特的選擇性和極低的檢測限，使這種分析手段在臨床、生物制藥和環境化學等領域得到廣泛應用。各種標記技術(放射性標記、酶標記、熒光標記、金標記、化學發光等)的發展，使免疫分析的選擇性更加突出。標記免疫分析一般是將酶、熒光素、放射性核素等標記物對抗體或抗原進行標記，這種標記物既保持了抗體或抗原的活性，也不影響標記物的活性，當它與相應抗體或抗原反應后，可以直接測定復合物中的標記物，從而直接對目標物質進行定量分析。通過標記物的信號放大作用，可以提高免疫分析技術的敏感性。免疫學檢測技術以其特異性強、靈敏度高、方便快捷、分析容量大、檢測成本低、安全可靠等優點，已成為21世紀最具競爭性和挑戰性的檢測分析技術。

目前采用免疫分析方法進行多殘留檢測常有兩種方法，一種是采用一類藥物的共有結構作為免疫半抗原，獲得對同類藥物具有特異性識別反應的廣譜抗體。另一種是采用將多個藥物的半抗原偶聯到載體蛋白上制備成人工抗原，經過動物免疫獲得對目標農藥有特異性識別的“寬譜特異性抗體（broad?specificity?antibody）”。抗體在多殘留免疫分析中的作用非常關鍵，抗體質量的好壞直接影響免疫分析的準確性和靈敏度，因此獲得好的抗體是多殘留免疫分析技術的首要工作，已報道的藥物多殘留免疫檢測的抗體均為多克隆抗體，由于多克隆抗體會隨著動物種類及個體差異而有變化，生產數量上也會受到一定的限制，制備的抗體可重復性差，在應用中會受到一定的限制，隨著單克隆抗體技術的出現，解決了抗體制備過程中抗體性狀不穩定的問題，并且單克隆抗體技術獲得的雜交瘤細胞在體外能無限量分泌性狀穩定的抗體，因此，在小分子藥物免疫分析中單克隆抗體已逐漸取代多克隆抗體。

傳統的免疫快速診斷技術中使用的抗體不論是多克隆抗體還是普通單克隆抗體，一個抗體分子均只識別一種或者一類抗原，使檢測范圍受到很大的限制，隨著單克隆雜交瘤技術的發展和不斷完善，?Milstein等首次報道了一株能分泌雙特異性單克隆抗體（Bispecific?Monoclonal?Antibodies,?BisMcAb）的雜交-雜交瘤（Hybrid?Hybridomas）細胞，標志著雙特異性單克隆抗體技術的創立。雙特異性單克隆抗體是結構上雙價，功能上單價的免疫球蛋白分子。其基本結構中兩個Fab端的結構和功能不相同，能分別結合兩種不同抗原。由于雙特異性單克隆抗體在結構上的特殊性，具有兩個不同的抗原識別位點，如果能把該抗體技術引入到藥物殘留快速診斷技術中來，特別是在面臨多殘留快速檢測技術需求的背景下，在一定程度上能滿足多殘留檢測所面臨的新的要求，該技術從抗體的結構和特性上入手，區別于傳統的多殘留免疫分析技術在半抗原和人工抗原的結構上進行一系列的改造，通過雜交-雜交瘤技術獲得能特異性識別兩種同類藥物甚至是結構差異大的兩類藥物的雙特異性單克隆抗體，與傳統的抗體快速檢測相比具有質的飛躍，為探索藥物多殘留快速檢測技術新的研究領域和發展方向方面具有重要意義。