[發明專利]一種海洋微藻來源的血管緊張素轉化酶抑制肽

有效

• 申請號: 201410172674.X
• 申請日: 2014-04-26
• 公開（公告）號: CN103923177A
• 公開（公告）日: 2014-07-16
• 發明（設計）人: 徐年軍;吳昊;孫雪;余虹
• 申請（專利權）人: 寧波大學
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C12P21/02;A61K38/08;A61P9/12;C07K1/16
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

技術領域

本發明屬于活性多肽篩選技術領域，具體涉及一種血管緊張素轉化酶抑制肽，即一種從海洋微藻球等鞭金藻中分離得到的血管緊張素轉化酶(ACE)抑制肽。

背景技術

血管緊張素轉化酶(Angiotensin?converting?enzyme,ACE)是一種鋅金屬蛋白酶，是羧基二肽酶，是腎素-血管緊張素系統中重要的蛋白酶之一。對人體血壓調節有著重要的作用，通過作用于血管緊張素I的末端去掉His-Leu生成血管緊張素Ⅱ，它能夠使動脈血管平滑肌收縮，迅速引起血壓上升。抑制ACE活性是一種使血壓下降的有效的方法。當前治療高血壓的藥物大多是化學合成品，存在一些不良反應，如咳嗽、味覺功能紊亂及皮疹等副作用。食源性蛋白為原料制得的ACE抑制肽由于具有安全性高、毒副作用小等優點，是降壓藥物研發的重要方向。

食品來源的ACE抑制劑由于其原料易得，一直受到人們的關注。如高冬芳等(食品科學，2011，32(7)：7)利用螺旋藻制備ACE抑制肽其IC₅₀值為74.6μg/mL，但具體結構未知。劉淑集等(食品科學，2011，32(2)：213)利用壇紫菜制備ACE抑制肽，其IC₅₀值為0.67mg/mL，其氨基酸結構也不確定。但是針對海洋微藻，特別是餌料微藻來源的ACE抑制肽方面的研究還未見報道。

發明內容

本發明的目的是提供一種新型的血管緊張素轉化酶抑制肽，即從球等鞭金藻中制備得到的一種ACE酶抑制肽，從而彌補現有技術技術的不足。

本發明首先提供一種多肽，其氨基酸序列為Tyr-Met-Gly-Leu-Asp-Leu-Lys(SEQ?ID?NO：1)；

上述多肽作為血管緊張素轉化酶抑制肽的應用，包括用于制備治療高血壓的制品；

所述的制品為包含有藥理有效濃度的上述多肽的食品或藥品；

本發明的多肽是從球等鞭金藻中分離的，具體分離步驟如下：

(1)球等鞭金藻蛋白的制備：

將球等鞭金藻按照1:15加入到1.5％氯化鈉溶液中，調整為pH為6.0-8.0，超聲波提取，破碎后4℃、5000r/min離心15min，分離上清液；沉淀的藻泥加入氯化鈉溶液超聲波再提取2次，合并上述提取的上清液，冷凍干燥即為粗蛋白；

(2)酶解：

將步驟(1)中粗蛋白，按照酶和粗蛋白比為6:100加入酶，溶液pH調整為8.0，在溫度為50℃的條件下進行酶解，酶解時間為3-6h；酶解完成后在90℃下滅活酶10min，然后取上清液；

(3)分離：

取步驟(2)中酶解得到得上清液，用0.45μm微孔濾膜過濾，將樣品上樣于平衡好的Sephadex?G-25凝膠色譜柱()，用醋酸-醋酸鈉緩沖液洗柱至220nm處吸收峰回到基線，用醋酸-醋酸鈉緩沖液對樣品進行洗脫，洗脫的流速是0.5mL/min。收集各個成分進行冷凍干燥并檢測活性，在-20℃條件下保存；

(4)純化：

取步驟(3)冷凍干燥的粉末，進過AKTA?purifier純化。流動相A相：純水；B相：甲醇，從0-100％梯度洗脫，流速為1.0ml/min。檢測波長為220nm，收集各個組分，冷凍干燥并檢測活性。收集保留時間約為24min的色譜峰，冷凍干燥，得到氨基酸序列為Tyr-Met-Gly-Leu-Asp-Leu-Lys的血管緊張素轉化酶抑制肽。

本發明所述的一種血管緊張素轉化酶抑制肽的制備方法。與現有技術相比，本發明具有如下的優點：(1)本發明提供了一種海洋微藻來源的高活性血管緊張素轉化酶抑制肽的制備方法。目前血管緊張素轉化酶抑制劑的來源主要是食品，以及紫菜等大型海藻，從餌料微藻中未見報道。(2)本發明獲得的一種具有獨特結構的活性多肽，其結構為Tyr--Met-Gly-Leu-Asp-Leu-Lys。該結構新穎，具有分子量小，易被人體吸收的特點。

附圖說明

圖1：本發明血管緊張素轉化酶抑制肽對原發性高血壓大鼠(SHR)的治療效果比較圖。

具體實施方式

下面結合具體實施例進一步闡明本發明。

實施例1血管緊張素轉化酶抑制肽的分離純化

(1)球等鞭金藻蛋白的制備：