[發明專利]一種保加利亞乳桿菌凍干菌粉制備方法

有效

• 申請號: 201410171964.2
• 申請日: 2014-04-25
• 公開（公告）號: CN103923835A
• 公開（公告）日: 2014-07-16
• 發明（設計）人: 陳合;陳世偉;舒國偉
• 申請（專利權）人: 陜西科技大學
• 主分類號: C12N1/04
• 分類號: C12N1/04;C12R1/225
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 蔡和平

技術領域

本發明屬于保加利亞乳桿菌制品生產技術領域，涉及一種保加利亞乳桿菌凍干菌粉制備方法。

背景技術

保加利亞乳桿菌(Lactobacillus?bulgaricus)是發酵生產乳制品的重要乳酸菌，其能賦予酸乳產品柔和的酸味和香氣，可以改進產品的品質和營養,還具有維持微生態環境、抗突變、抗腫瘤、降血脂和提高免疫力等重要功能,因此一直是食品工業、醫藥和微生態學等領域關注的熱點。

菌種在真空冷凍干燥時，酶的活性喪失少，并能保持菌種形態、色澤，冷凍干燥菌粉復水性好，脫水徹底，保存期長，儲存運輸和使用都很方便。但是，在實際的使用時，冷凍干燥過程中水的結晶、細胞的失水等情況使得菌體出現死亡或損傷，對于菌種的保存、生產使用非常不利。有報道稱，菌體在無任何保護措施下凍干時會使其存活率很低，甚至低至0.1％。

目前，利用凍干技術制備和貯存保加利亞乳桿菌菌粉己有很多報道。在實際使用中，需要獲得高活菌數的菌粉和減少細胞在凍干過程中的損傷。目前最主要的方法是在冷凍干燥前加入凍干保護劑來制備凍干菌粉，如CN102952755A中公開了一種保加利亞乳桿菌凍干復合保護劑，其配方如下：20～30重量份乳糖、20～30重量份脫脂乳粉、3～5重量份抗壞血酸鈉、0.2～0.6重量份聚乙二醇4000、0.2～0.8重量份聚乙烯吡咯烷酮、0.5～2.0重量份牛血清白蛋白和100份蒸餾水。另外也有大量關于保加利亞乳桿菌凍干菌粉的報道。對于保加利亞乳桿菌的増菌，專利CN102952722A公開了一種保加利亞乳桿菌的增菌培養基和制備方法，其增菌培養基配方如下：每100mL蒸餾水包括0.4g乳糖、0.4mL新生牛血清、0.8g酪蛋白水解物、0.090mL質量濃度為1％的羥脯氨酸、0.050mL質量濃度為1％的谷氨酸和0.59g?K₂HPO₄。專利CN1844354A也公開了一種保加利亞乳桿菌增菌培養基，其主要成分為：菊芋汁基礎培養基100mL、5-15mL番茄汁、0.5-2g蛋白胨、0.1-1.0g乳糖。還有許多研究者也報道了保加利亞乳桿菌增菌培養基。專利CN103387939A報道了一種適于25℃發酵酸奶的保加利亞凍干菌粉的制備方法。

凍干保護劑的使用極大地提高了菌體在真空冷凍干燥下的存活率和凍干菌粉的穩定性，還可以在培養基中添加一些分子物質，這些物質可在保加利亞乳桿菌培養時于體內積累或轉化成其它物質，進而抑制凍干過程中細胞損傷的發生。這些物質的添加也可改變保加利亞乳桿菌細胞膜脂肪酸組成，甚至誘導細胞產生大量的抗凍蛋白，從而有效提高保加利亞乳桿菌菌體的抗冷凍能力，可以達到減少甚至避免菌體凍干損傷、提高活菌存活率和菌粉活菌數、減少復合凍干保護劑的添加量、延長凍干保加利亞乳桿菌菌粉常溫保存期的目的。目前還沒有檢索到有關使用保加利亞乳桿菌増菌抗凍培養基來制備凍干菌粉的報道和發明專利。同時，使用“藥食同源”藥物中的有效物質來刺激保加利亞乳桿菌的菌體增殖、作為抗凍因子和作為凍干保護劑的報道也較少。

發明內容

本發明的目的是提供一種更好地開發利用我國中藥資源作為凍干保護劑、提高菌體抗凍能力的保加利亞乳桿菌凍干菌粉制備方法。

本發明的技術方案包括以下步驟：

a)菌種活化與增殖培養：將保加利亞乳桿菌接種到MRS液體培養基中活化，將已活化的菌種接種于增殖抗凍培養基中增殖培養，得到增殖的菌液；

b)收集菌體：將上述增殖的菌液離心處理，棄去上清液，得到菌泥；

c)干燥：在所制備的菌泥中按每克菌泥添加0.2-0.24g脫脂奶粉、0.06-0.1g抗壞血酸鈉、0.8-1.4mL的磷酸緩沖液、0.1-0.3g薏苡仁和山藥混合多糖提取物，混合均勻后真空冷凍干燥，即得保加利亞乳桿菌凍干菌粉；

所述増殖抗凍培養基配方組成為：乳糖10-20g、海藻糖2-6g、白扁豆多糖0.2-0.6g、低聚木糖2-4g、酵母提取物4-10g、大豆蛋白胨8-10g、谷氨酸鈉0.6-1.0g、檸檬酸氫二銨1.0-2.0g、乙酸鈉1.0-2.0g、磷酸氫二鉀1.0-2.0g、MnSO₄0.01-0.06g、吐溫800.5-1.0mL、蒸餾水1000mL。

所述步驟a)中活化是指將保加利亞乳桿菌接種到MRS液體培養基中于35-38℃培養22-26h，再按每100mL培養基中接種3-5mL菌種的比例，接種于與上述MRS液體培養基相同的培養基中，并在相同條件下活化至第三代。