[發(fā)明專利]一種保加利亞乳桿菌凍干菌粉制備方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201410171964.2 | 申請(qǐng)日： | 2014-04-25 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN103923835A | 公開（公告）日： | 2014-07-16 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 陳合;陳世偉;舒國偉 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 陜西科技大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | C12N1/04 | 分類號(hào)： | C12N1/04;C12R1/225 |
| 代理公司： | 西安通大專利代理有限責(zé)任公司 61200 | 代理人： | 蔡和平 |
| 地址： | 710021 *** | 國省代碼： | 陜西;61 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 保加利亞 桿菌 凍干菌粉 制備 方法 | ||
1.一種保加利亞乳桿菌凍干菌粉制備方法，其特征在于：包括以下步驟：
a)菌種活化與增殖培養(yǎng)：將保加利亞乳桿菌接種到MRS液體培養(yǎng)基中活化，將已活化的菌種接種于增殖抗凍培養(yǎng)基中增殖培養(yǎng)，得到增殖的菌液；
b)收集菌體：將上述增殖的菌液離心處理，棄去上清液，得到菌泥；
c)干燥：在所制備的菌泥中按每克菌泥添加0.2-0.24g脫脂奶粉、0.06-0.1g抗壞血酸鈉、0.8-1.4mL的磷酸緩沖液、0.1-0.3g薏苡仁和山藥混合多糖提取物，混合均勻后真空冷凍干燥，即得保加利亞乳桿菌凍干菌粉；
所述増殖抗凍培養(yǎng)基配方組成為：乳糖10-20g、海藻糖2-6g、白扁豆多糖0.2-0.6g、低聚木糖2-4g、酵母提取物4-10g、大豆蛋白胨8-10g、谷氨酸鈉0.6-1.0g、檸檬酸氫二銨1.0-2.0g、乙酸鈉1.0-2.0g、磷酸氫二鉀1.0-2.0g、MnSO40.01-0.06g、吐溫800.5-1.0mL、蒸餾水1000mL。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種保加利亞乳桿菌凍干菌粉制備方法，其特征在于：所述步驟a)中活化是指將保加利亞乳桿菌接種到MRS液體培養(yǎng)基中于35-38℃培養(yǎng)22-26h，再按每100mL培養(yǎng)基中接種3-5mL菌種的比例，接種于與上述MRS液體培養(yǎng)基相同的培養(yǎng)基中，并在相同條件下活化至第三代。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種保加利亞乳桿菌凍干菌粉制備方法，其特征在于：所述步驟a)中增殖培養(yǎng)的接種比例為每100mL增殖抗凍培養(yǎng)基中接種3-5mL已活化的菌種。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種保加利亞乳桿菌凍干菌粉制備方法，其特征在于：所述步驟a)中增殖培養(yǎng)是于35-38℃下培養(yǎng)16-18h。
5.根據(jù)權(quán)利要求1至4任意一項(xiàng)所述的一種保加利亞乳桿菌凍干菌粉制備方法，其特征在于：所述增殖抗凍培養(yǎng)基的配置步驟包括：
首先按量稱取乳糖、白扁豆多糖、酵母提取物、大豆蛋白胨、檸檬酸氫二銨、乙酸鈉、磷酸氫二鉀、MnSO4和吐溫80溶解于蒸餾水a(chǎn)中，加熱溶解、攪拌均勻，再調(diào)pH值至6.4-6.6，按照裝量70％-90％盛放于厭氧瓶中，于118-121℃滅菌15min，冷卻至室溫，得到已滅菌的培養(yǎng)基；
再稱取海藻糖、低聚木糖和谷氨酸鈉溶解于蒸餾水b中，所述蒸餾水a(chǎn)和蒸餾水b的總量為1000mL，混合均勻后過濾除菌，將濾液與上述已滅菌的培養(yǎng)基按照無菌操作要求混合均勻，即得保加利亞乳桿菌增殖抗凍培養(yǎng)基。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種保加利亞乳桿菌凍干菌粉制備方法，其特征在于：所述白扁豆多糖的制備步驟包括：
首先將5份干燥的白扁豆粉碎后浸泡于100-150份蒸餾水中，調(diào)節(jié)pH值至5.0-6.8；
其次在40-55℃的水浴溫度下加入白扁豆質(zhì)量0.5-2％、活力為8000-10000U/g的纖維素酶和白扁豆質(zhì)量1-2％、活力為20000-30000U/g的果膠酶，保溫1.5-2.5h后加熱至沸騰，再保溫15-20min；
然后抽濾并將濾液濃縮，向濃縮液中加入三倍體積的無水乙醇，靜置10-14h后抽濾，將所得濾渣于45-55℃烘干，即得白扁豆粗多糖；
最后取干燥的白扁豆粗多糖溶于水浴加熱至50-70℃的蒸餾水中，按每0.5g白扁豆粗多糖溶于15-20mL蒸餾水的比例計(jì)算，得到多糖溶液，在多糖溶液中加入白扁豆粗多糖質(zhì)量1-4％的木瓜蛋白酶，酶解0.5-1h后得酶解液，酶解液使用多糖溶液15-25％體積的Sevag試劑除蛋白20-30min；2000-4000rpm離心15-20min后取上清液，反復(fù)離心處理三次，得到的上清液經(jīng)真空冷凍干燥后即得白扁豆多糖。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種保加利亞乳桿菌凍干菌粉制備方法，其特征在于：所述步驟b)中離心處理為0-4℃、8000-10000rpm離心15-20min。
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