[發(fā)明專(zhuān)利]一種嗜熱鏈球菌凍干菌粉制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410171384.3
• 申請(qǐng)日: 2014-04-25
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103937725A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-07-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳合;陳世偉;舒國(guó)偉
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 陜西科技大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12N1/20
• 分類(lèi)號(hào): C12N1/20;C12R1/46
• 代理公司: 西安通大專(zhuān)利代理有限責(zé)任公司 61200
• 代理人: 蔡和平

1.一種嗜熱鏈球菌凍干菌粉制備方法，其特征在于：包括以下步驟：

a)菌種活化與增殖培養(yǎng)：將嗜熱鏈球菌菌種接種到M17液體培養(yǎng)基中活化，將已活化的菌種接種于增殖抗凍培養(yǎng)基中增殖培養(yǎng)，得到增殖的菌液；

b)收集菌體：將上述增殖的菌液離心處理，棄去上清液，得到菌泥；

c)干燥：在所制備的菌泥中按每克菌泥添加0.14-0.2g蔗糖、0.12-0.18g可溶性淀粉、0.002-0.004g?Vc、0.5-1.0mL的磷酸緩沖液、0.1-0.3g薏苡仁和山藥混合多糖提取物，混合均勻后真空冷凍干燥，即得嗜熱鏈球菌凍干菌粉；

所述増殖抗凍培養(yǎng)基配方組成為：10-20g葡萄糖、10-25g大豆蛋白胨、5-10g酪蛋白水解物、0.005-0.010mg谷氨酸、2-4g?KH₂PO₄、0.5-1mL吐溫80、白扁豆多糖0.2-0.5g、蒸餾水1000mL。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種嗜熱鏈球菌凍干菌粉制備方法，其特征在于：所述步驟a)中活化是指將嗜熱鏈球菌菌種接種到M17液體培養(yǎng)基中于35-38℃培養(yǎng)22-26h，再按每100mL培養(yǎng)基中接種2-5mL菌種的比例，接種于與上述M17液體培養(yǎng)基相同的培養(yǎng)基中，并在相同條件下活化至第三代。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種嗜熱鏈球菌凍干菌粉制備方法，其特征在于：所述步驟a)中增殖培養(yǎng)的接種比例為每100mL增殖抗凍培養(yǎng)基中接種2-5mL已活化的菌種。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種嗜熱鏈球菌凍干菌粉制備方法，其特征在于：所述步驟a)中增殖培養(yǎng)是于35-38℃下培養(yǎng)16-18h。

5.根據(jù)權(quán)利要求1至4任意一項(xiàng)所述的一種嗜熱鏈球菌凍干菌粉制備方法，其特征在于：所述培養(yǎng)基均已滅菌，且所述增殖抗凍培養(yǎng)基經(jīng)過(guò)118-121℃、15min滅菌處理并室溫冷卻。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種嗜熱鏈球菌凍干菌粉制備方法，其特征在于：所述白扁豆多糖的制備步驟包括：

首先將5份干燥的白扁豆粉碎后浸泡于100-150份蒸餾水中，調(diào)節(jié)pH值至5.0-6.8；

其次在40-55℃的水浴溫度下加入白扁豆質(zhì)量0.5-2％、活力為8000-10000U/g的纖維素酶和白扁豆質(zhì)量1-2％、活力為20000-30000U/g的果膠酶，保溫1.5-2.5h后加熱至沸騰，再保溫15-20min；

然后抽濾并將濾液濃縮，向濃縮液中加入三倍體積的無(wú)水乙醇，靜置10-14h后抽濾，所得濾渣于45-55℃烘干，即得白扁豆粗多糖；

最后取干燥的白扁豆粗多糖溶于水浴加熱至50-70℃的蒸餾水中，按每0.5g白扁豆粗多糖溶于15-20mL蒸餾水的比例計(jì)算，得到多糖溶液，在多糖溶液中加入白扁豆粗多糖質(zhì)量1-4％的木瓜蛋白酶，酶解0.5-1h后得酶解液，酶解液使用多糖溶液15-25％體積的Sevag試劑除蛋白20-30min；2000-4000rpm離心15-20min后取上清液，反復(fù)離心處理三次，得到的上清液經(jīng)真空冷凍干燥后即得白扁豆多糖。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種嗜熱鏈球菌凍干菌粉制備方法，其特征在于：所述步驟b)中離心處理為0-4℃、8000-10000rpm離心15-20min。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種嗜熱鏈球菌凍干菌粉制備方法，其特征在于：所述薏苡仁和山藥混合多糖提取物的制備步驟包括：

首先將5份干燥的薏苡仁和去皮的山藥混合物粉碎后浸泡于150-200份蒸餾水中，其中薏苡仁和去皮的山藥按1:1混合，調(diào)節(jié)pH值至6.0-7.0，在80-100℃水浴溫度下提取1-2h，冷卻至40-55℃；

接著在40-55℃水浴下加入占上述薏苡仁和去皮的山藥混合物質(zhì)量1-2.5％的果膠酶和0.8-1％的α-淀粉酶，并保溫1.5-2.0h后加熱至沸騰，再保溫10-15min；

然后抽濾并將濾液濃縮，向濃縮液中加入3-4倍體積的95％乙醇，靜置10-14h后抽濾，所得濾渣即為粗混合多糖；

最后用80％乙醇溶液洗滌粗混合多糖，過(guò)濾后將所得沉淀于45-55℃烘干，即得薏苡仁和山藥混合多糖提取物。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種嗜熱鏈球菌凍干菌粉制備方法，其特征在于：所述步驟c)中真空冷凍干燥是在凍干機(jī)中進(jìn)行18-24h。

10.根據(jù)權(quán)利要求1或9所述的一種嗜熱鏈球菌凍干菌粉制備方法，其特征在于：所述步驟c)中真空冷凍干燥之前在-40℃預(yù)凍6-14h。