[發(fā)明專利]一種辣椒素人工半抗原、人工抗原及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410171292.5
• 申請日: 2014-04-25
• 公開（公告）號: CN103951577A
• 公開（公告）日: 2014-07-30
• 發(fā)明（設計）人: 李培武;馬飛;張奇;楊青青;張良曉;丁小霞;張文
• 申請（專利權）人: 中國農業(yè)科學院油料作物研究所
• 主分類號: C07C233/18
• 分類號: C07C233/18;C07C231/12;C07K14/765;C07K14/77;C07K14/795;C07K1/107;C07K16/44;G01N33/566
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102
• 代理人: 喬宇

技術領域

本發(fā)明涉及一種辣椒素人工半抗原、人工抗原及其制備方法，屬于免疫化學技術領域。背景技術?

近年來，把非正常食用油(俗稱地溝油)摻入合格食用油中以獲取利益的行為屢禁不止，嚴重威脅著消費者的健康，成為當前我國食品安全領域亟須解決的問題。?

國家科技部、工商總局、質檢總局、食品藥品監(jiān)管局、糧食局以及中國疾控中心等7部委聯(lián)合攻關地溝油鑒定方法，主要包括：重金屬含量、多環(huán)芳烴、膽固醇、3-氯丙二醇及其酯、粘度、電導率、介電常數(shù)等，但由于地溝油來源多、成分復雜，現(xiàn)有檢測方法不能實現(xiàn)對通過白土吸附脫色、水洗、真空高溫脫臭等精煉處理，摻入正常食用油進行銷售的新型地溝油進行識別，迄今仍缺乏能夠有效鑒別方法。?

我國傳統(tǒng)飲食習慣及口味愛好中辣椒是使用量較大、應用范圍廣泛的調味品，辣椒素是引起辣味的主要化學成分，主要存在于辣椒屬植物的果實及種子中。辣椒素具有脂溶性、強穩(wěn)定性好、沸點高等性質，而餐飲行業(yè)的泔水油是地溝油的主要來源之一，目前地溝油加工工藝很難完全去除具有以上性質的化合物。正常食用油基本不含辣椒素，而接觸過辣椒的餐廚廢棄油脂難以避免地含有這類成分，因此辣椒素能夠作為鑒別餐廚廢棄油脂的特征指標。現(xiàn)有辣椒素的檢測方法主要是高效液相色譜法(HPLC)、液質聯(lián)用法(LC/MS)，需要對樣品進行稀釋、過濾、提取、凈化，操作復雜、繁瑣、檢測成本高、周期長，無法滿足大批量樣品快速篩查，尤其是現(xiàn)場快速檢測的要求。免疫分析是基于抗原、抗體的特異性反應的一種分析方法，在醫(yī)學上已廣泛應用于微量物質的檢測。免疫分析具有特異性強、靈敏度高、分析容量大、方便快捷、成本低廉等優(yōu)點，近年來得到迅速發(fā)展。?

建立免疫分析方法，首先必須制備出對辣椒素特異性強、親和力高的抗體。由于辣椒素分子量較小，不具備刺激機體產生針對辣椒素抗原決定簇的特異性抗體，作為小分子抗原其必須與大分子載體偶聯(lián)后才具有免疫原性。要實現(xiàn)與大分子物質的偶聯(lián)，半抗原分子上必須具備能共價結合到載體上的活性集團(如氨基、羧基、羥基和巰基等)。影響免疫分析方法的關鍵因素在于特異的抗原和抗體，因此獲得一種可免疫獲得特異性好，親和力高的辣椒素抗體的抗原具有十分重要的意義。?

發(fā)明內容

本發(fā)明的發(fā)明目的是提供一種新型的辣椒素人工半抗原、人工抗原及其制備方法。?

為解決上述技術問題，本發(fā)明采用的技術方案。?

本發(fā)明提供的辣椒素人工半抗原化合物，具有式Ⅰ所示的分子結構：?

其化學名稱為4-[2-甲氧基-4-(壬酰胺甲基)苯氧基]丁酸。?

所提供的辣椒素人工抗原化合物，其分子結構式如式Ⅱ所示：?

按上述方案，所述載體蛋白為牛血清白蛋白BSA、卵清白蛋白OVA或鑰孔血藍蛋白KLH。?

上述特異性辣椒素人工半抗原的合成方法，以N-(4-羥基-3-甲氧基芐基)壬酰胺與4-溴代丁酸乙酯為原料經溴代成醚反應，得到式Ⅲ化合物，然后將其中的酯基團水解制得辣椒素人工半抗原即化合物Ⅰ，合成路線如下：?

按上述方案，所述辣椒素人工半抗原的制備方法，包括以下步驟：?

(1)將摩爾比為1:(1.2～1.5)的N-(4-羥基-3-甲氧基芐基)壬酰胺和4-溴丁酸乙酯分別溶解于N,N-二甲基甲酰胺中，得到相應的N-(4-羥基-3-甲氧基芐基)壬酰胺溶液和4-?溴丁酸乙酯溶液，然后將4-溴丁酸乙酯溶液置于恒壓漏斗，緩慢滴加至N-(4-羥基-3-甲氧基芐基)壬酰胺溶液中，待滴加完畢，在105～110℃條件下反應5-7h，后處理得到中間產物Ⅲ；?

(2)將中間產物Ⅲ在堿性條件下水解，后處理得到辣椒素人工抗原。?

按上述方案，所述步驟(1)的后處理為：將反應液過濾，減壓蒸餾除去溶劑得淡黃色的油狀物粗產品，然后將該粗產品通過硅膠柱層析，柱層析試劑：體積比為1:1的石油醚和乙酸乙酯混合液，脫色即得。?

按上述方案，所述步驟(2)的后處理為：將反應液用乙醚洗滌，棄去有機相，水相調節(jié)PH值3-4，用乙酸乙酯對水液進行萃取，收集有機相，無水硫酸鈉過夜，抽濾，減壓蒸餾即得。?

上述辣椒素人工抗原的制備，它是將辣椒素人工半抗原通過N,N’-二環(huán)己基碳二亞胺DCC與N-羥基琥珀酰亞胺NHS活化后，再與載體蛋白進行偶聯(lián)得到。?

上述辣椒素人工抗原的制備方法，包括以下具體步驟：?