[發(fā)明專利]檢測水和水稻植株中的井岡霉素A的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410169872.0
• 申請日: 2014-04-25
• 公開（公告）號: CN104280495A
• 公開（公告）日: 2015-01-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張昌朋;趙華;吳珉;平立鳳;朱亞紅;張春榮;何紅梅;湯濤
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/14
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務(wù)所有限公司 33100
• 代理人: 向慶寧

1.一種檢測田水中井岡霉素A的方法，其特征在于，該方法由以下順序的步驟組成：1）、量取田水樣品10?mL到刻度管中，加入甲酸水，?調(diào)節(jié)田水的pH值為2-3，混勻，待凈化；2）、凈化的步驟包括：提供MCX小柱，3cc/60mg,；用3mL甲醇和3mL水分別按照順序添加進(jìn)行活化MCX小柱，2?mL的經(jīng)0.2%甲酸水酸化后的田水樣品全部上樣，3mL甲醇淋洗，用吸耳球吹干MCX小柱中的液體；3mL的5%氨水甲醇溶液洗脫MCX小柱，洗脫液在50℃條件下濃縮干，用甲醇定容到2.0?mL，過0.22μm濾膜，進(jìn)行檢測。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，在10?mL田水樣品中加入10?mL0.2%甲酸水，讓混合后的液體pH值為2.7。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，甲酸水的濃度為0.2%。

4.一種檢測水稻中井岡霉素A的方法，其特征在于，該方法由以下順序的步驟組成：1)、從水稻中提取井岡霉素A，其中提取的方法包括：稱取成熟期干燥的水稻莖稈2g（精確至0.01g），加入60?mL甲醇/水溶液（8/2，V/V）振蕩1小時后，布氏漏斗抽濾到分液漏斗中，獲得的濾液用石油醚（100mL×2）萃取兩次，棄去石油醚相，甲醇/水混合相在60℃濃縮干，加入4mL純凈水溶解；2）、再在4mL純凈水溶解的溶液中加入甲酸水，?讓溶液的PH為2-3，混勻，待凈化；3）、凈化的步驟包括：提供MCX小柱，3cc/60mg；用3mL甲醇和3mL水分別按照順序添加進(jìn)行活化MCX小柱，2?mL的經(jīng)0.2%甲酸水酸化后的田水樣品全部上樣，3mL甲醇淋洗，用吸耳球吹干MCX小柱中的液體；3mL的5%氨水甲醇溶液洗脫MCX小柱，洗脫液在50℃條件下濃縮干，用甲醇定容到2.0?mL，過0.22μm濾膜，進(jìn)行檢測。

5.根據(jù)權(quán)利1或4所述的方法，檢測的方法包括采用超高效液相色譜進(jìn)行測定，測定的條件為：色譜柱：ACQUITY?UPLC?Hilic（1.7μm，2.1×100mm，Waters公司）；流動相：乙腈/10M?Mol?醋酸銨溶液=?70/30；流速：0.2mL/min；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：1μL；質(zhì)譜條件：毛細(xì)管電壓：3.0KV；離子源溫度：150℃；去溶劑溫度：400℃；去溶劑氣流量800L/hr；錐孔反吹氣流量：30L/hr；碰撞氣流量：0.15?mL/min；定量模式：MRM模式；電離方式：ESI+；母離子：498.2；錐孔電壓28；碰撞能量為28eV的定量離子：178.2；碰撞能量為24eV的定性離子：336.19。

6.一種檢測水稻中井岡霉素A的方法，其特征在于，該方法由以下順序的步驟組成：1)、從水稻中提取井岡霉素A，其中提取的方法包括：稱取成熟期干燥的水稻莖稈2g，加入60?mL甲醇/水溶液（8/2，V/V）振蕩1小時后，布氏漏斗抽濾到分液漏斗中，獲得的濾液用石油醚（100mL×2）萃取兩次，棄去石油醚相，甲醇/水混合相在60℃濃縮干，加入4mL純凈水溶解；2)、凈化：3mL甲醇、3mL水分別按照順序添加進(jìn)行活化HLB小柱，取2mL溶解液全部上樣，3mL純凈水洗脫，用吸耳球吹干HLB小柱中的液體；洗脫液收集經(jīng)過HLB小柱的溶解液和洗脫液到平底燒瓶中，50℃條件下濃縮干，甲醇定容到2.0?mL，過0.22μm濾膜過濾，待測定。